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神经干细胞的研究进展
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　　长期以来,人们一直认为,成年哺乳动物脑内神经细胞不具备更新能力,一旦受损及至死亡,不能再生,这种观点使Parkinson病、多发性硬化及脑脊髓损伤的治疗受到了很大的限制。近年来科学家对神经干细胞的研究是脑科学领域的重要成果之一,它突破了以往一直认为成年动物神经细胞不能分裂再生的观念,为研究神经细胞的发育分化过程,也为神经系统疾病的治疗开辟了一条全新的途径。1992年Reynolds等[ 1 ]从成年小鼠纹状体分离出能够在体外不断分裂增殖,具有多向分化潜能的细胞群,提出了神经干细胞( neural stem cell,NSC)的概念。神经干细胞是指能自我更新,且具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等多向分化潜能的细胞。分化的各类神经细胞可以表达一些特异性标志,如神经元表达MAP2 (microtubule associatep rotein22) 、NSE ( neuron specific enolase ) 、NF ( neural fila2ment) ,星形胶质细胞表达GFAP ( glial fibrillary acidic p ro2tein) ,少突胶质细胞表达GC ( galactocerebroside) 。本文作者结合自己的研究工作,对神经干细胞目前的研究进展作一综述。1. 　神经干细胞的生物学特性神经干细胞的主要生物学特征包括: ( 1)具有多向分化潜能,能分化成本系大部分类型的细胞即神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞; (2)具有自我更新和自我维持的能力。神经干细胞通过两种细胞分裂方式,即不对称分裂和对称分裂,来维持干细胞库的稳定。干细胞的一次不对称分裂产生一个新的干细胞和一个祖细胞(p rogenitor cell) ,以此类推,新产生的干细胞又可发生同样的不对称分裂,通过这种分裂方式产生一系列分化程度不同的子代细胞,直到最终形成终末分化细胞,以满足神经细胞多样性的需求。一次对称分裂产生两个干细胞或两个祖细胞。祖细胞是相对于干细胞而言,其分化能力、自我更新能力受到一定限制,仅具有单向或双向分化能力或其干细胞特性只能维持较短的时间。在发育时间上,应是神经干细胞早于神经祖细胞。啮齿类动物,胚胎期的神经干细胞能够迅速分裂、增殖,产生大量细胞,以满足发育期神经干细胞对细胞数目的大量需求,这种活跃增殖只持续一周左右,出生后神经系统已基本形成,这些神经干细胞增殖渐渐变慢,只存留于中枢神经系统的一些特定部位。到了成年期,神经干细胞的特点是维持相对静息状态,只有机体需要的时候快速扩增,这时它们的自我更新只是为了维持体内神经干细胞群体的存在[ 2 ]。2. 　神经干细胞的定位分布近期的研究结果表明,在发育期胚胎和成年哺乳类动物的中枢神经系统存在着具有多向分化潜能的神经干细胞或前体细胞。胚胎时期是神经系统快速增长发育的阶段,在这时期许多部位都存在神经干细胞,这包括大脑皮质、纹状体、海马、嗅球、小脑、脊髓等区域[ 3 ]。以往曾一度认为成年动物中枢神经系统不存在神经干细胞,但近年科学家发现成年人脑的侧脑室壁和海马等区域仍存在具有增殖分化能力的神经干细胞,成年小鼠前脑的室管膜和室管膜下区细胞都有增殖能力,但仅室管膜下区细胞有神经干细胞特性[ 4 ]。3. 　神经干细胞的标志物人的造血干细胞可以根据其细胞表面标志蛋白如CD34 + , Thy21 + , CD133 +纯化分离。可是到现在神经干细胞还没有特异性的细胞表面标志物,人们鉴定了在神经干细胞中表达的几种蛋白, 它们包括Musashi 1, nestin, vimentin,CD133, GFAP等。nestin,属于第Ⅵ类中间丝蛋白,仅在胚胎早期神经上皮表达,出生后停止表达;在神经前体细胞最先表达的是nes2tin, vimentin次之,随后两者共存。一旦神经前体细胞朝向终末方向分化成神经元和胶质细胞(如星形胶质细胞)时, nes2tin便停止表达,成熟神经元和星形胶质细胞分别表达其特异性标志物:神经丝和GFAP[ 5 ]。因此nestin被广泛用于神经干细胞的鉴定。vimentin,波形蛋白,属于第Ⅲ类中间丝蛋白。由于波形蛋白的表达比较早,起始于神经迁移完成时,分化完成后表
达下降,因此也被一些人作为神经祖细胞的标志物。Musashi 1, RNA结合蛋白,最先在果蝇中发现,是果蝇感觉神经前体细胞不对称分裂所必需的蛋白[ 6, 7 ]。随后证明Musashi 1选择性地在各种哺乳类动物的神经干细胞/祖细胞表达,并在维持干细胞状态和分化中发挥重要的作用[ 8211 ]。因此,Musashi 1被作为哺乳类神经干细胞的标志蛋白[ 12 ]。CD133,又称AC133,最早由Miraglia等[ 13 ] 1997年报道为一种新的细胞表面抗原,是相对分子量为120 kD五次跨膜的糖基化多肽,表达于人的造血干细胞表面[ 14 ]。分选的CD133阳性的胚胎来源的脑细胞能增殖形成细胞球,而CD133阴性的细胞不能形成细胞球。因此,有人把它作为神经干细胞的表面标志蛋白。GFAP,胶质纤维酸性蛋白,属于第Ⅲ类中间纤维,是星形胶质细胞的标志蛋白。报道发现位于室管膜下区的细胞表达GFAP,显示出神经干细胞的特性。因此有人提出GFAP也可用来标示部分神经干细胞[ 15 ]。4. 　神经干细胞的移植研究内部微环境的影响: 　被移植的NSC易受移植部位局部环境因素的影响,向移植部位特异性细胞的方向分化。如将海马源性神经干细胞系HiB5移植到新生雪貂的海马和小脑,发现这种细胞可以整合到宿主神经组织中,并且表现移植区细胞的形态及特性[ 16 ]。从成体海马分离出的贴壁生长的NSC在体外培养一年后,再移植到成年大鼠的海马,发现仍向海马神经元分化[ 17 ]。本身内在性质的影响: 　分离较早发育时期的皮层神经前体细胞,移植到较晚发育时期的受体皮层时,供体细胞可以分化成为受体皮层的各层细胞[ 18 ] ;而将较晚发育时期的皮层前体细胞植入较早发育时期的动物皮层时,细胞只分化成为发育上较晚的皮层细胞[ 19 ] ,提示某些内在性质也能够影响细胞的分化。最近有人将成年小鼠室管膜下区的NSC移植到大脑的不同部位,发现移植细胞在嗅球处发生广泛的整合,并分化为成熟神经元,而在纹状体和皮层只有小范围整合和分化[ 20 ]。这些结果提示NSC的分化是其本身性质和环境因素共同作用的结果。5. 　神经干细胞的可塑性在多数情况下,成体干细胞分化为与其组织来源一致的细胞,但是在某些情况下,成体干细胞的分化并不遵循该规律,表现出很强的跨系或跨胚层分化潜能,人们称其为干细胞的“可塑性”。成体干细胞的可塑性和胚胎细胞的多能性(p luripopent)有相似之处。NSC→神经前体细胞→成熟神经元、胶质细胞这一类似"中心法则"的规律正被越来越多的事实所证实。Kondo等[ 21 ]将P6视神经处的少突前体细胞体外培养,分别依次加入PDGF (p latelet2derived growth factor) , FCS ( fetal calf serum) ,bFGF ( basic fibroblast growth factor) ,发现加入bFGF后形成了类似NSC体外培养所出现的神经球;而细胞贴壁后,在bFGF作用下72%的少突前体细胞分化为MAP2 阳性, A2B5阴性的神经元细胞。该结果说明少突前体细胞在外源因子的作用下具有逆分化能力。另外,最近研究显示NSC具有跨胚层分化能力,能够分化为数种非神经细胞[ 22 ]。Galli等[ 23 ]将从人胚胎和成年小鼠分离的NSC与骨骼肌的成肌细胞共培养,发现NSC可分化为骨骼肌细胞。Bjornson等[ 24 ]用胚胎和成年的NSC以及体外克隆的NSC,移植给亚致死剂量照射的小鼠,结果证明NSC可转化为造血细胞。尽管以上所述的可塑性的机制非常复杂,但是,它使人们对NSC的研究寄予新的期望,即NSC可以作为多种细胞的来源用于临床部分疾病的治疗。当然,其它组织的成体干细胞在适当条件下也能转化成神经干细胞,如成年动物造血干细胞可分化为脑的星形胶质细胞和少突胶质细胞。Kempermann等[ 25 ]的研究发现,将骨髓的间充质细胞(MSC)注射至新生鼠的侧脑室后,在海马、嗅球、纹状体等部位均有MSC来源的神经胶质细胞和神经元,提示MSC具有一定的迁移能力和更广泛的应用前景。Sanchez等[ 26 ]将取自成鼠及成人的骨髓基质干细胞,在体外诱导分化为神经前体样细胞(表达nestin) 、神经元样(表达neuN)及星形胶质样细胞(表达GFAP) ,他们发现,骨髓基质干细胞与胚胎中脑组织共培养会使骨髓基质干细胞分化为神经细胞的比例提高两倍。Toma等[ 27 ]在啮齿动物(包括幼年和成年个体)的皮肤中发现了具有多向分化能力的皮肤源性祖细胞( skin2derived p recursors, SKP) , SKP在体外可分化为神经元、胶质细胞及平滑肌等细胞;另外,新生儿脐血中的单核细胞体外培养的结果显示:其在特定的诱导体系中,能分化表达出神经元、神经胶质细胞的表面抗原[ 28 ]。这些发现预示着一种获取方便、可用于自身移植的干细胞治疗技术有可能得到应用。6. 　神经干细胞的来源哺乳动物脑内胶质细胞数量众多,在神经系统中发挥着许多重要的作用。但是最近的研究发现胶质细胞还有意料不到的作用,即在成年和胚胎脑中充当干/祖细胞。成年哺乳动物室管膜下区( SVZ)的星形胶质细胞在体内是这个区域的初级前体细胞,在体外表现干细胞特性。Doetsch等[ 15 ]用GFAP2TVA转基因技术发现,被绿色荧光蛋白标记的SVZ胶质细胞在体外能生长为具有多个分化潜能并能自我更新的细胞球,直接证明了它们的干细胞特性。放射状胶质细胞( radial glia)在胚胎中是神经元的祖细胞。在成年脊椎动物SVZ胶质细胞是干细胞这一意料不到的发现引起人们想到在胚胎发育中放射状胶质细胞可能是干/祖细胞这一有趣的可能性。放射状胶质细胞具有早期神经上皮细胞的特征,比如nestin的表达。早期通过逆转录病毒的研究发现了单个放射状胶质细胞和神经元克隆的存在,这种现象也许是胶质细胞通过不对称自我更新分裂产生另一个放射状胶质细胞及一个神经元的证据[ 29 ]。最近的实验无论是通过直接适时记录皮质放射状胶质细胞的图像方法,还是在切片培养中感染复制不完全的GFP +逆转录病毒或GFP +腺病毒方法,都清楚地表明了单个的放射状胶质细胞可以通过不对称分裂产生神经元[ 30, 31 ]。另外,在体外培养并
经流式细胞仪纯化的放射状胶质细胞及胚胎胶质细胞都能产生神经元[ 32, 33 ]。反过来,转基因技术研究也表明几乎所有的从皮质投射的神经元和许多纹状体中间神经元都来源于放射状胶质细胞[ 34, 35 ]。以上证据表明,在胚胎期放射状胶质细胞是神经干细胞。但也提出了一些问题亟待阐明,如: (1)在胚胎发育中能产生神经元的放射状胶质细胞是否是在成年中转变为具有干细胞特性的胶质细胞? (2)在发育中干细胞是否经历了改变? (3)神经上皮干细胞是否等同于成年的具有干细胞特性的胶质细胞? (4)在发育过程中干细胞的潜能是否变的越来越受到限制?7. 　前景展望当前NSC的应用受到人们的高度重视,具有引人入胜的无限生命力。移植治疗神经退行性疾病是一充满希望与挑战的生物工程,有着广泛的应用前景。虽然,神经干细胞的研究工作已取得了重大的突破,但仍存在许多问题亟待解决。如成人神经干细胞的确切定位和功能;其特定功能状态的调控机理;体外操作对干细胞分化特性的影响;干细胞定向分化的诱导因子以及它们作用的机制等等,此外,干细胞研究与胚胎的伦理地位、克隆人等若干问题也有着极为密切的关系。因此,要想使干细胞技术早日在临床上广泛应用,这些问题必须尽快解决。
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售前咨询服务QQ： 京ICP备号祖细胞和干细胞是一回事吗它们有什么异同呢
不是同一种东西祖细胞是指一类由干细胞分化而来的细胞,已失去自我更新能力的过渡性增生性细胞群体,在一定条件下能分化成单一的细胞,也称为定向干细胞 干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,在一定条件下,它可以分化成多种功能细胞.
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神经干细胞治疗小儿脑瘫的研究进展（综述）
　　　　　　　　　　神经干细胞治疗小儿脑瘫的研究进展　　　　 （我实习的医院做这方面的临床研究非常多，也非常火。这是我今年本科毕业时写的综述，下了很大的功夫，教授已经修改过，尚未发表，请各位多提意见！愿听高教！）　　　　关键词：神经干细胞 neural stem cell 小儿脑瘫 cerebral palsy　　小儿脑瘫，是以慢性、非进行性运动功能障碍为特征的一组症候群，患儿常伴有不同程度的认知障碍。脑瘫的发生多与产伤、早产儿缺血缺氧、出生后感染和中毒等因素有关。随着早产儿存活率的升高，脑瘫的发病率也上升至人口总数的0.06%-0.59%。我国此类患儿不少于250万，且每年新增患者约20万左右。目前尚未找到一种直接针对脑瘫患儿脑损伤病理基础的治疗方法，因此多数治疗效果欠佳。而神经干细胞治疗具有潜在的功效，在其它神经系统疾病(如中风等)中的应用已取得较好的效果，所以人们开始对干细胞移植治疗脑瘫进行了各种实验研究。从现有的动物实验数据看，神经干细胞治疗小儿脑瘫是一项颇有前景的治疗方法。现将部分研究结果综述如下。1 小儿脑瘫的病理基础&& 　　许多脑瘫患儿由于灰、白质都缺少，因此需要采用有全脑细胞成分的干细胞。被移植的细胞要有显著的可塑性及适合相应部位定向发展的潜能。　　缺血缺氧性损伤是脑瘫的特征性损害，它以广泛的神经组织缺失为特征。缺血缺氧损伤的早产儿其损伤在大脑白质内，主要表现为脑室旁大脑白质容积减少，称为脑室旁脑白质软化症（periventricular leukomalacia，PVL）。脑室周围主要的细胞类型是少突胶质前体细胞，它对缺血缺氧损伤最为敏感，在怀孕30-36周时最易损伤而导致PVL。缺血缺氧损伤可耗竭围产期大鼠脑室下层(subventricular zone，SVZ)的少突胶质前体细胞和神经干细胞。此种变化在损伤后很快就会发生，并对少突胶质前体细胞以后的发育产生不良影响。少突胶质细胞分布在神经元胞体附近和神经纤维周围，其突起末端扩展成扁平薄膜，包绕神经元的轴突形成髓鞘，它是中枢神经系统的髓鞘形成细胞，其发育障碍直接导致白质的发育障碍。少突胶质前体细胞在小儿脑瘫是重要的，是否在不替代轴突的情况下，仅仅替代轴突髓鞘的绝缘性就能改善功能，这一点还需要进一步证实。2
移植的细胞类型　　用来移植的细胞类型、来源、发育阶段是神经干细胞移植研究和讨论的主要内容，而用于临床试验的理想细胞应具有以下特征：容易获得，不涉及伦理问题，有足够的增殖潜能，没有感染、肿瘤转移的危险，并能改善临床症状。如果用自体细胞进行移植，还可免除排斥反应的影响。总的来看，临床上可供移植的细胞类型有：成人或胚胎的神经干细胞、永生神经前体细胞 (如NT2-N 细胞)、原始骨髓组织、骨髓间质细胞、外周血单核细胞、脐带血细胞、脐带基质细胞等。2.1神经干细胞和永生细胞系
神经干细胞可在脑内特定部位进行增殖、迁移、分化，而不同的培养方式可对移植后细胞的行为产生显著的差异。胚胎神经干细胞在刚植入时增殖能力极强，但经过培养后再植入成年小鼠的脑室下层和纹状体后，增殖和分化能力明显降低。神经干细胞在成熟的脑组织中，多分布于脑室旁、室管膜下区或者海马区域，在实验室中所表现的特性与胚胎神经干细胞相似。细胞所具有的增殖和分化特性在脑内不同部位是不同的。　　NT2细胞是从畸胎癌患者提取出的神经元祖细胞中得到的，这些神经元祖细胞经过类维生素A（retinoic acid）处理后，分化为神经元细胞。Ferrari等［1］证实把未分化的NT2细胞移植到未受伤的小鼠脑内，NT2可迁移一定的距离并分化为神经元和少突胶质细胞，而将NT2细胞植入受伤的有免疫活性的小鼠大脑皮层后，细胞在海马齿状回的颗粒下层和侧脑室壁的脑室下层增殖扩散，并产生具有功能的锥体神经元。2.2 原始的骨髓组织、骨髓基质细胞和其它血细胞
骨髓中的非造血细胞包括能分化形成间叶细胞、神经元和胶质细胞的骨髓基质干细胞(marrow mesenchymal stem cells, MSCs)。原始的骨髓组织经过培养能产生神经祖细胞。在对接受原始骨髓组织移植患者的尸检中，研究人员发现受体脑组织中的一部分神经元就来源于移植的原始的骨髓组织。将MSCs经脑室、腹腔、纹状体或直接脑局部移植后，同期给予脑源性神经营养因子，在脑内可检测到骨髓源性的神经元细胞。MSCs在大鼠脱髓鞘的脊髓中可形成髓鞘，在大脑中动脉阻塞的大鼠中可产生内皮细胞和神经元，这表明MSCs是具有多潜能的成体祖细胞，可分化成具有中胚层、内胚层和神经胚层的细胞。
从人的外周血的单核细胞中也可提取出多能干细胞，它们在一定条件下能分化为神经元细胞。脐带血和脐带血基质细胞可作为神经元细胞的来源，可分化成多种神经细胞，包括神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞。给大脑中动脉阻塞的动物模型静脉注入脐带血，可见2%的细胞表达了神经元标志物，2周后动物的行为表现明显改善。脐带血基质细胞和脐带血细胞对于小儿脑瘫患者而言都有自体同源的优点，很有希望成为今后研究的细胞来源。此外在移植的细胞不能太纯，应混有施旺细胞，它可支持神经干细胞的生长，并有诱导其分化的作用［2］。
对干细胞的分化、增殖调控机制的了解对干细胞移植是关键的，但人们对其了解得并不多。FGF2 在调节干细胞分化和嗅球神经形成上有重要作用［3］。Olig1基因的短暂表达可促进神经干细胞向少突胶质前体细胞的分化［4］。而在神经干细胞向损伤部位的迁移过程中，间质细胞来源的1alpha/CXC可发挥趋向作用［5］。过度表达的Bcl-2基因，也可使患鼠脑皮质处的干细胞存活增加、分化加强，功能也较非基因修饰的对照组明显改善［6］。　　但哪一种细胞更适宜移植治疗小儿脑瘫呢？哪一分化阶段的细胞最适于移植呢？分化早期的细胞比分化相对成熟的细胞更有优势吗？经过培养分化成具有一定定向能力后再行移植会更好吗？目前这些均不清楚，如果要在临床应用中取得最好的效果，那么这些问题都需进一步的研究，并得到明确的回答。3 移植的方法与时机　　如果采用直接移植到脑内，那么应在接近损伤部位选择穿刺点。在一个大脑中动脉阻塞的脑缺血模型中移植MHP36细胞(来自转基因小鼠的上皮细胞)后，发现不同移植位置有不同的效果。脑实质内注射可减少双侧不对称性，但对空间学习能力无明显提高，相对应的是经脑室内移植的动物其空间学习能力明显提高，而双侧不对称性无改善。而移植入纹状体的细胞可越过中线，进入对侧同样的部位，并分化成与对应位置一致的细胞亚型。在中风后，病变侧半球可吸引移植的干细胞，这提示修复利用了局灶性的修复机制，另一方面是将对侧的神经通路的功能强化扩展［7］。脑室内与脑实质内移植的不同效果提示二者有不同的机制，需要进一步研究。　　近来有人将神经干细胞种植在一种多聚体骨架上，再将其直接移植入缺血缺氧性损伤鼠的脑梗塞区。此法可促进宿主与NSCs的相互作用，利于神经生长的精细进行，结果显示实质损失显著地减少，包括宿主与供者来源的神经元构成的多树状的复杂神经网络出现，同时也形成了一些解剖联系，但移植后的行为功能的改善状况没有报道。这些生物桥通过促进一系列相应的NSCs与宿主间的相互作用来促进功能的重塑，包括促进神经元的分化、强化神经处理的细节、促进皮质组织的再形成、促进胞间通讯、减少炎症与瘢痕形成、促进神经组织的修复［8］。　　另外移植方法是将细胞悬液注入脉管系统或是直接注入椎管蛛网膜下腔。Jeong等［9］在颅内出血的大鼠模型中，经静脉移植干细胞后检测其分化的细胞中10%为神经元75%为星形胶质细胞。2周后经转杆试验测试，干细胞移植组功能改善明显。作者认为经静脉移植后的神经干细胞可以进入颅内出血的大鼠脑内，并在脑内存活、迁移、分化从而促进其功能恢复。另一项实验对大脑中动脉阻塞大鼠伤后1、7、14天分别经静脉移植入MSCs，结果表明1天后MSCs就在脑内生成神经元和星形胶质细胞和神经元，在1、7天时接受移植动物的躯体感觉恢复明显，神经系统的评分升高，而在大脑内仅出现少量的MSC来源的神经元，这说明接受移植后所表现出的改善不仅与移植入的细胞本身有关，而且可能与神经营养因子有关，这说明经静脉途径移植同样有效［10 11］。　　伤后移植时间的问题较少受到关注，因为大多数动物实验都是在伤后即刻进行的，本问题就不存在或不重要。但在临床上对病人的处理，在时间上则有一定的滞后性的。那么具体是在伤后多久行移植手术有意义或处于最佳的手术时机呢？一般而言，移植的时间当然应是在伤后越短的时间内进行效果越佳，在伤后一定间期内进行移植是有效的，有文献报导移植间期长短与移植成功的细胞数目呈反比，但具体时机尚无精确数据。4
移植后的功能重建　　目前有大量实验表明植入细胞可以成活，并分化成特定的神经细胞，但这些植入的细胞是否与原存的细胞整合，并为实现一定的功能而形成有机的联系呢？通过显微镜和免疫组织化学的方法对移植后的标本进行观察，形态学上的证据是植入的细胞和脑组织可融为一体。植入的NSCs可整合入宿主的神经环路，并发育为有功能的锥体细胞，其可产生潜在活力、能接收邻近细胞兴奋或是抑制信息的细胞。　　Toda等［12］在成熟大鼠海马区分化来源的神经干细胞中加入FGF后干细胞可较早地产生神经元和神经胶质细胞。利用免疫荧光技术观察到某些大鼠海马区分化来源的神经干细胞对微管相关蛋白2ab、神经丝 200和突触小泡蛋白具有免疫反应性。这些细胞已具有了功能神经元的一些特性，比如：动作电位、突触后的微电流等。作者认为，成熟干细胞分化来源的神经元能表达非NMDA谷氨酸受体和GABA受体，并可形成功能性的突触，实验结果证实神经元已整合入神经环路。　　更多的结果在于直接观察到功能的改善。无论选择何种方法，不论是细胞的直接作用还是经体液因子的辅助作用，功能是否得到改善是评价其好坏的主要标准。来源于小鼠的多能祖细胞系的NSCs可在损伤的脑组织中存活，分化为神经系统的成分，改进运动功能障碍的症状。在实验中对单侧脑皮质损伤的C57BL/6小鼠3天后通过立体定向方法将NSCs移植至脑皮质损伤区，在13周后在邻近损伤的海马与皮层区域可检测到移植神经干细胞的存活，它们可表达神经元标志NeuN或胶质细胞标志物GFAP，通过转杆试验检测，结果表明移植后小鼠的运动功能较未移植小鼠明显改善［13］。　　在一个大鼠短暂全脑缺血模型中，大鼠大脑海马CA1区域的锥体神经元细胞数量减少约90-95%，直接在此处定向移植入海马来源的NSCs后，14天后在损伤部位只有1%-3%的植入细胞成活，其中3%-9%表达神经系统的标志物NeuN。通过水迷宫试验证实多于120个神经元标志物阳性细胞的大鼠在空间学习能力方面有改善［14］。大脑中动脉阻塞1个月的动物在大脑内移植NT2细胞，同时应用环孢菌素，其功能有明显改善。对CA1区缺血性损伤的大鼠，向其受伤侧的大脑半球植入海马干细胞系MHP36细胞后，通过尼氏染色表明移植物在CA1区可形成锥体样细胞并长入侧脑室，MHP36细胞可表现出神经元与胶质细胞的形态, 在CA1区均有分布，同时其感觉、运动功能得到恢复，但其空间学习能力和记忆力没能恢复。这表明神经干细胞能适应移植的部位并分化成成熟的神经元与胶质细胞，在以后的研究中，作者认为移植于损伤的对侧也能产生作用，这表明移植具有远距离效应，细胞能迁移到对侧受损区域［15］。　　Zhao 等报导应用自体干细胞移植治疗开放性颅脑损伤的临床一、二期病人，用超顺磁性微粒体作NSCs标记物，结果显示干细胞在脑内有较好的生长活性，并能明显改善病人的预后［16］。5
移植的安全性　　安全性问题包括：移植细胞造成感染、注入细胞所引起的炎症和排斥反应的危险等。如应用于临床，这些问题都需要进一步澄清。Farci等［17］对进行造血干细胞移植治疗的患者进行随访分析，发现部分病人出现严重的神经系统的并发症，272例因不同的疾病而接受移植的患儿有2例出现免疫性疾病。最严重的风险出现在同种异体移植上，而行同种自体移植时出现神经系统并发症的概率就大大降低。大量报道认为此种方法是安全可行的［18］。细胞移植应用于临床需要具备以下的条件：固定的场所和团队、术前仔细检查病人并针对不同的病人制定特定的治疗方案、选择恰当的细胞类型和恰当的移植时机、方法，从而保证移植的安全和治疗的质量。6
小结　　通过动物实验证实，用干细胞治疗脑瘫和脑损伤可明显改善功能。但其作用机制尚未明了，其长期的安全性和有效性也不清楚，在人体也没有严格对照实验数据。干细胞应用于临床将影响到医学的每个领域，并对脑瘫等许多疾病的治疗带来希望。然而此项技术应用于儿童之前，还有大量工作要做，比如在移植细胞的功能整合中细胞因子、生长因子、信号蛋白的作用，还有病人的个体化治疗，在最后的阶段应用灵长类动物模型进行实验也是必需的。总之，动物实验的数据强有力地证实将干细胞治疗应用于脑瘫临床是大有裨益的，我们相信在不远的将来应用干细胞治疗脑瘫就将成为现实。　　　　参考文献：1 Ferrari A, Ehler E, Nitsch RM, et al. Immature human NT2 cells grafted into mouse brain differentiate into neuronal and glial cell types.FEBS Lett. 2000 Dec 8;486(2):121-5. 2 An Y H，Wan H，Zhang Z, et al.Effect of rat Schwann cell secretion on proliferation and differentiation of human neural stem cells. Biomed-Environ-Sci. 2003 M 16(1): 90-43 Zheng W, Nowakowski RS, Vaccarino FM .Fibroblast growth factor 2 is required for maintaining the neural stem cell pool in the mouse brain subventricular zone. Dev-Neurosci. 2004 Mar-A 26(2-4): 181-96.4 Balasubramaniyan V, Timmer N, Kust B, et al. Transient expression of Olig1 initiates the differentiation of neural stem cells into oligodendrocyte progenitor cells. Stem-Cells. 8-825 Imitola J, Raddassi K, Park KI, et al. Directed migration of neural stem cells to sites of CNS injury by the stromal cell-derived factor 1alpha/CXC chemokine receptor 4 pathway. Proc-Natl-Acad-Sci-U-S-A.. 2004 Dec 28; 101(52): 18117-22.6 Wei L, Cui L, Snider BJ ,et al .Transplantation of embryonic stem cells overexpressing Bcl-2 promotes functional recovery after transient cerebral ischemia. Neurobiol Dis. 2005 Jun-J19(1-2):183-93.7 Modo M, Stroemer RP, Tang E, et al. Effects of implantation site of stem cell grafts on behavioral recovery from stroke damage.Stroke. ):2270-8.
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