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溶菌酶肠溶片
临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘．带状疱疹和扁平疣等。
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溶菌酶肠溶片
本品系自新鲜鸡蛋清中提取的一种能分解粘多糖的碱性蛋白酶。
临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘．带状疱疹和扁平疣等。
适用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘．带状疱疹和扁平疣等的患者。
口服，一次50-100mg(5-10片)，一日3次。
杭州国光药业有限公司
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【药品名称】
通用名称：溶菌酶肠溶片
商品名称：溶菌酶肠溶片
英文名称：Enteric-coated Tablets
【主要成份】 本品系自新鲜鸡蛋清中提取的一种能分解粘多糖的碱性蛋白酶。
【性 状】 本品为肠溶衣片，除去肠溶衣片后显白色。
【适应症/功能主治】
临床用于慢性鼻炎、急慢性咽喉炎、口腔溃疡、水痘．带状疱疹和扁平疣等。
【规格型号】10mg*100s
【用法用量】口服，一次50-100mg(5-10片)，一日3次。
【不良反应】口服不良反应少，偶见过敏反应，有皮疹等表现。
【禁 忌】对本品过敏者禁用。
【注意事项】
1.本品为肠溶衣片，应整片吞服，以防药物在胃中被破坏。
2.连续使用3天后炎症仍未消除，应向医师咨询。
3.请将本品放在儿童不能触及的地方，儿童须在成人监护下使用。
4.当药品性状发生改变时禁止使用。
【儿童用药】尚不明确。
【老年患者用药】尚不明确。
【孕妇及哺乳期妇女用药】尚不明确。
【药物相互作用】如与其他药物同时使用可能会发生药物相互作用，详情请咨询医师或药师。
【药物过量】尚不明确。
【药理毒理】本品是在生物体内广泛分布的一种粘多糖水解酶，能液化革兰阳性菌细胞壁的不溶性多糖，将其水解成可溶性粘肽，是一种具杀菌作用的天然抗感染物质，具有抗菌、抗病毒、抗炎、增强抗生素疗效及加快组织修复的作用。
【药代动力学】口服容易吸收，血中有效浓度可维持10-12小时。
【贮 藏】密封。
【包 装】塑料瓶包装，每瓶100片，每盒1瓶。
【有 效 期】24 月
【批准文号】国药准字H
【生产企业】杭州国光药业有限公司
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【药品名称】
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溶菌酶及其在抗菌杀菌技术领域中的应用
14:48:27 来源：&聂实践
溶菌酶由单核-巨噬细胞分泌，是溶酶体酶的一种，作用于细菌和部分真菌的细胞壁肽聚糖，是一种高效的抗菌剂。
溶菌酶（E.C，3.2.1.17）是由英国细菌学家弗莱明在1922年发现的[1]，它广泛存在于自然界动物、植物和微生物中，其全称为1,4-β-N-溶菌酶，又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶。大量研究证明，溶菌酶由单核-巨噬细胞分泌，是溶酶体酶的一种，作用于细菌和部分真菌的细胞壁肽聚糖，是一种高效的抗菌剂，它能切断肽聚糖中N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β-1,4糖苷键，破坏肽聚糖支架，在内部渗透压的作用下细胞胀裂开，引起菌体裂解死亡[2]。人和动物的细胞无细胞壁结构亦无肽聚糖，故溶菌酶对其没有毒性作用。1 溶菌酶的来源和分类1963年乔利斯和坎菲尔德研究了溶菌酶的一级结构，两年后英国的菲利普及其同事们用X射线衍射法解析了溶菌酶，这是世界上第一个完全弄清了立体结构的酶，是近代酶化学研究的最大成果之一。溶菌酶广泛存在于家禽和鸟类的蛋清中以及哺乳动物的泪液、唾液、血浆、尿液、乳汁、白细胞及其他体液和组织（如肝、肾）细胞内，从大麦、芜菁、无花果、木瓜、卷心菜、萝卜等植物中也能分离出溶菌酶，其中以蛋清中含量最高（约0.3%），但人乳、眼泪、唾液中的溶菌酶活性却远高于蛋清中（约为3倍）或其他来源的溶菌酶的活性[3]。除了这些天然原材料外，现在还可以通过基因工程手段获得溶菌酶。例如人溶菌酶（ humanlysozyme，hLY）是由130个氨基酸残基组成，相对分子量14700kb。国内外有很多关于hLY基因克隆、表达的报道。Takaki报道用基因化学合成方法合成hLY的全基因（包括hLY前体信号肽的18个氨基酸残基基因），并将它转至酵母菌细胞中表达，获得高效表达的hLY。Maria报道从人体组织细胞系U-937提取总RNA，经逆转录为cDNA后克隆至真核表达载体中表达。钱世钧等报道用基因化学合成的方法合成hLY的全基因（基因序列是根据大肠杆菌偏爱的密码子设计，不包括hLY的前体信号肽部分），克隆至原核表达载体中进行了高效表达。蛋清溶菌酶可分解溶壁小球菌、芽孢杆菌等革兰氏阳性菌，但对一些常见的致病细菌如大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌等革兰氏阴性菌基本上不起作用，由此可见，虽然蛋清溶菌酶含量最丰富，但杀菌范围小，作用有限。人或动物的溶菌酶则具有广谱的杀菌效果，并具有生物相容性好、对组织无刺激、无毒性的特点，最早是从人或动物的乳汁、胎盘中提取，由于来源困难，提取方法复杂，不能进行大规模工业化生产。所以采用基因工程技术，从细菌或酵母中生产溶菌酶是解决其供需矛盾的主要途径。根据溶菌酶的不同结构可将其分为C型、G型和噬菌体型溶菌酶[4]。C型溶菌酶由129或130个氨基酸残基组成，相对分子量约为14700kb，其活性中心为Glu-35、Asp-52、Trp-62和Trp-108，是唯一同时存在于脊椎动物、原索动物（文昌鱼）和无脊椎动物中的类型，也是目前研究得最广泛、最透彻的类型，大部分溶菌酶都属于C型，鸡蛋卵清溶菌酶、从人的乳汁、尿液、胎盘中提取的溶菌酶都属于C型。G型溶菌酶即鹅卵清溶菌酶，约含185个氨基酸残基，相对分子量为21000kb。噬菌体溶菌酶存在于各种噬菌体内，对溶解宿主菌起重要作用，它含有164个氨基酸残基，相对分子量为187000kb。2 溶菌酶的理化特性溶菌酶是一种碱性球蛋白，分子中碱性氨基酸、酰胺残基及芳香族氨基酸如色氨酸的比例很高。溶菌酶是非常稳定的蛋白质，pH在1.2～11.3范围内剧烈变化时，其结构几乎不变，对于溶菌酶的活性来说，最理想的条件是pH6.0～7.0。溶菌酶遇热也很稳定，pH4.0～7.0，100℃处理1min仍能保持原酶活性；pH5.5，50℃加热4h后，酶变得更活泼。它的热变性是可逆的，变性的临界点是77℃，随溶剂的变化变性临界点也有变化，当变性剂pH在1以下时，变性临界点降到43℃。一般说来，变性剂能促进酶的热变性，但变性剂过量时，溶菌酶的热变性不可逆。在碱性环境中，用高温处理时，酶活性降低。氧化剂也能对酶的活性起阻遏作用，而食盐则相反能起活化作用。粉状溶菌酶若采用低温干燥贮存，几乎可长期不变质。即使在pH为中性的水溶液中，该酶也可维持数天而不损失其活性。3 溶菌酶在抗菌杀菌技术领域中的应用溶菌酶是一种天然抑菌、杀菌蛋白质，具有其他物理和化学杀菌因子所不具备的安全性、无污染等特性。这就决定了它将在各类抗菌杀菌技术领域中有广泛的应用。3.1 食品保鲜防腐溶菌酶是一种天然存在的蛋白质，无毒无害，可直接用于食品的防腐保鲜。张凤凯等成功研究了一种溶菌酶冷却肉保鲜剂Hnsafety-008，该保鲜剂完全采用安全、无毒、天然的物质科学的配比而成，可以延长冷却肉的保质期1-4倍。并且该保鲜剂可耐受95℃以下的温度，而保持性质稳定。溶菌酶也可用于乳制品的防腐，在奶酪加工过程中添加一定量的溶菌酶可以防止中后期奶酪的起泡、变味，还可以保持奶酪老化过程中奶酪基液的品质，更重要的是其123014 April 总第三十八期可以起到长期的杀菌作用，有效控制酪酸的发酵。除此之外，溶菌酶也可用于食品软包装材料的抗菌保鲜、酒及饮料的防腐、水产品的杀菌消毒等方面。3.2 空气净化杀菌空气中的细菌是吸附在尘埃微粒上的，常见的致病菌有结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌、百日咳鲍特菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、脑膜炎奈瑟菌、军团菌等，可引起呼吸道传染病或伤口感染，考虑到安全因素，通常采用玻璃纤维HEPA等过滤器对空气进行过滤净化除菌。然而，微生物容易在HEPA上繁殖、扩散，形成二次污染。国内有人研究成功了一种溶菌酶PPHEPA过滤器，它将溶菌酶固载在HEPA的整个滤纸纤维上，可以在纤维内部捕捉杀灭微生物，有效地防止二次污染。3.3 口腔杀菌消炎细菌是口腔疾病发生的主要原因，龋齿、牙髓炎、根尖周炎和部分口腔黏膜病都和口腔细菌的感染密不可分。溶菌酶目前已经应用于口腔疾病的预防和治疗。在口腔内应用溶菌酶可以修复组织，有利于口腔溃疡的愈合。溶菌酶与增效剂、稳定剂还可制成口腔清洁液，对几种引起口腔疾病的致病菌，如葡萄球菌、溶血性链球菌、白色念珠菌等有抑杀作用，经过检测，5min内杀菌率达99.9%。急性毒性试验、蓄积毒性试验、微核试验、黏膜刺激试验等安全性评价，均符合要求。体外杀菌试验也证明，溶菌酶复合制剂能有效抑制和杀灭口咽部致病菌，可以有效治疗急慢性咽炎、扁桃体炎等口腔疾病。3.4 医疗中皮肤的抗菌、杀菌护理肽聚糖是细菌细胞壁的重要组成成分，溶菌酶可水解肽聚糖中N-乙酰胞壁酸（NAM）和N-乙酰葡糖胺（NAG）中的β-1,4糖苷键，在渗透压作用下导致细菌细胞壁破裂，发生溶菌作用。在体内环境下，由于有分泌型免疫球蛋白A、补体参与，溶菌酶还能水解某些革兰氏阴性菌，如Ecoli等。由于真菌细胞壁中NAM和NAG之间形成的β-1,4糖苷键（几丁质）也是溶菌酶作用的底物，所以溶菌酶可以抗含有几丁质细胞壁的真菌感染。溶菌酶还能与各种诱发炎症的酸性物质结合，使其失活，并增强抗生素和其他药物的疗效，改善组织基质的粘多糖代谢，从而有利于修复被炎症损伤的组织。人溶菌酶能激活血小板，改善局部组织循环障碍，分解脓液，增强局部防卫，从而更好地抗菌、消炎、止痛。3.5 溶菌酶在擦伤、烧伤创面感染中的应用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ Methicillin-resistant taphylococcus aureus,MRSA）是烧伤创面感染的主要菌株之一，近年来感染发生率不断上升，由于多种抗生素和创面外用药物的使用及菌株的变异，出现了MRSA及中间型抗万古霉素金黄色葡萄球菌等耐药菌株，其感染程度难以控制，导致创面不愈合。李罗珠等用复合溶菌酶治疗190例烧伤患者，使用48.96h后，对MRSA的有效率98%～100%，对中间型抗万古霉素金黄色葡萄球菌的有效率为10%～33%，从而证明复合溶菌酶对MRSA及中间型抗万古霉素金黄色葡萄球菌有显著的杀菌效果，是治疗烧伤创面感染的用药选择之一。目前临床上应用的溶菌酶很多是鸡蛋清溶菌酶，由于它是一种异源蛋白，在动物体内会产生免疫原性和副作用。通过基因工程获得的溶菌酶则不然，它本来就是动物体内的一种蛋白质，和动物体具有天然相容性，而且其抗菌、杀菌作用更强，因此，采用基因工程技术,从细菌或酵母中生产人或动物的溶菌酶，开发新的溶菌酶资源，降低生产成本，才能促进溶菌酶在实践中的应用。随着医药技术的发展，对溶菌酶的需求量也日益增大，溶菌酶必将在将来的医疗中发挥越来越大的作用。参考文献[1] Fleming A.On a remarkable bacteriolytic element found intissues and ecretions[J]. Proc R Soc Lond B Biol Sci,.[2] 贾向志,李元. 溶菌酶的研究进展[J]. 生物技术通讯, ):374～377.[3] 林向阳. 溶菌酶及其应用研究[J]. 中国食品添加剂, ):103～106.[4] Imoto T. Enjoying Research on ysozyme for 42 years[J].Yakugaku asshy, ):377～386.
72小时热文溶菌酶有杀菌作用，是因为它能够（　　）A. 阻止多种病菌的呼吸B. 阻止多种病菌的消化C. 破坏多种病菌的细胞壁D. 吞噬多种病菌
唾液中的溶菌酶杀灭了口腔中某种致病细菌，属于第二道防线是体液中的杀菌物质--溶菌酶，具有溶解、吞噬和消灭病原体的作用．溶酶体里有多种酶，其中吞噬细胞里的溶酶体能使多肽和糖类分解，从而使细菌的细胞壁破坏．故选：C
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新型牛溶菌酶基因构建、表达及活性研究.pdf68页
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关键词：牛、溶菌酶、pGE 【-
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实验三 溶菌酶的溶菌作用
[实验目的]
证实体液中溶菌酶的存在及溶菌酶对革兰氏阳性菌的溶解作用。
[基本原理]
溶菌酶的杀菌机理是其作用于细菌细胞壁的粘肽层，粘肽是细菌的细胞壁主要成分。溶菌酶能切断粘肽结构中的N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β- 1,4糖苷键，破坏粘肽支架，使细胞壁破坏。由于细菌细胞壁的重要功能之一是保护细菌，即抗低渗，故细菌失去细胞壁的保护作用后，在低渗环境中可发生溶解。溶菌酶的主要作用对象是革兰氏阳性菌。革兰氏阴性细菌细胞壁粘肽层外还有脂多糖、外膜和脂蛋白结构，故在一般情况下溶菌酶不易发挥直接做用。
[实验材料]
•& 溶壁微球菌（ M.Lysodeikticus）：本菌是由空气中分离出的一种革兰氏阳性菌，对人不致病，菌落黄色，普通琼脂培养基生长良好，每月传代一次或冻干保存，用于制备溶壁微球菌琼脂平板。
•& 标准溶菌酶：称取溶菌酶标准纯品，用 1/15mol.L -1 PBS配制为1000ug/ml原液，并稀释为100、50、10 ug/ml标准液，用前保存在冰箱中；用于阳性对照及制备标准曲线。
•& 唾液：用无菌平皿收集唾液，可在同学间收集。
•& 其它：无菌打孔器（孔径 2mm），无菌毛细吸管、米尺等。
[实验方法]
•& 用无菌打孔器在溶壁微球菌琼脂平板上打孔，用针头挑出孔内琼脂，孔径 2mm左右，孔距5-20mm。
•& 用毛细吸管取新鲜收集的唾液加入琼脂孔内，每孔加一滴，每滴约有 0.025ml,同时加标准溶菌酶作阳性对照。
•& 置 24-28 C°下12-18h观察结果。
[实验结果]
用小米尺或三角板量取小孔周围溶菌环直径，并作记录，可与标准溶菌酶阳性对照作对比观察。
如需定量测定检品（唾液）中的溶菌酶含量，可将上述各种稀释度的溶菌酶标准溶液，分别加入小孔中，同法测定溶菌环直径，用半对数纸制成标准曲线，检品中的溶菌酶含量可从标准曲线上查出。
•& 溶壁微球菌琼脂平板的制作：①溶壁微球菌在使用前于琼脂斜面上传代一次，然后接种于普通琼脂平板 ,37C°培养24小时，用1/15mol.L -1 PBS或无菌蒸馏水洗下菌苔，洗涤两次，2000r/min，离心30min，弃上清，称量沉淀物湿重, 用无菌蒸馏水配成100mg/ml的菌液。②称取优质琼脂粉1g加入1/15mol.L -1 PBS 100ml,制成1%琼脂。③取上述菌液1ml, 加入加热融化并放至50-60 C°的琼脂中，摇匀倾注平板。冷凝后即为溶壁微球菌琼脂平板。
•& 1/15mol.L -1 PBS的制备：①1/15mol.L -1 KH2PO4: KH2PO4 9.07g加蒸馏水至1000 ml；②1/15mol.L -1 Na2HPO4: 1/15mol.L -1 Na2HPO411.87g加蒸馏水至1000 ml；③1/15mol.L -1 PBS(pH6.4)：取1/15mol.L -1 KH2PO4 73ml加1/15mol.L -1 Na2HPO427ml,加NaCL0.5g即为pH6.4的1/15mol.L -1 PBS。}