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ELISA试剂盒实验中封闭更关键
点击次数：16 发布时间： 11:19:55
封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高，怀疑封闭不充分，那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。如果您一直被背景问题所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和检测试剂。ELISA试剂盒好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。最常用的非离子型去污剂是Tween-20。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%)，它会降低特异结合，产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。蛋白封闭液则有所不同，是永久的。它们与开放位点结合并封闭，同时稳定与微孔板结合的抗原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。血清组分的内在多样性可使它有效拦截许多不同类型的分子相互作用。不过，它的缺点在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。解决这个问题的一种方法是使用鸡或鱼的正常血清。
号：48T/96T
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请输入您的咨询或建议详细信息ELISA实验过程中,怎样才能减少实验误差?
泽速浪0457
误差是由很多细节造成的 减少误差的方法有很多 比如做实验时少说话,防止唾液掉进酶标条中；加入一抗二抗需要放入37°C,如果同时做多个板子,多个板子别罗一起；尽量少用排枪；加样时,由低浓度向高浓度加,这样减少跳孔的几率；勤换枪头.还有细节,需要自己再发掘
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个人经验：一 移液器的使用，加样（抗体）等需要准确定量的试剂时不使用排枪，经验证明排枪很不准确，极易跳孔 不要图便宜买低档的tips 因为ELISA不但会放大被检测的目的蛋白，也会放大非特异结合的杂质蛋白二 倍比稀释样品时，稀释倍数最好要小于10三 所有的装跟ELISA相关试剂的容器，玻璃制品的要干烤过或者使用一次性的树脂容器...
1.进行复孔实验，通过各孔颜色及吸光度的对比，减少实验误差，更好地反映实际情况；2.制作标准曲线，根据样品所测得的吸光度与标准曲线进行对比，更好的进行样品的分析。但是如果样品所测得的吸光度高于标准曲线所有的吸光度，则标准曲线需要重制或者说，将所测的抗原或者抗体进行一定倍数的稀释后重做一次实验，保证所测得的吸光度在标准曲线范围内才有效。我知道这两点，希望对你有帮助！...
扫描下载二维码当前位置：>>>封闭液
2012年12月份
ELISA实验的原理似乎很简单，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗涤和封闭。然而，即使是平淡无奇的洗涤和封闭，如果做得不太好，也有可能毁了整个实验。在实验结束时，我们是否能获得有意义的信息，这在很大程度上取决于结果的信噪比。背景噪音会影响您对结果的判断。如何降低ELISA的背景，下面有一些tips。
2012年08月份
碧云天生产的Western封闭液(Blocking Buffer)可以用于Western时转移了蛋白样品的PVDF膜或NC膜的封闭。封闭后，可以减小后续的一抗或二抗和膜的非特异性结合，降低背景，增强信噪比。
2012年08月份
2012年08月份
碧云天生产的化学发光法EMSA试剂盒(GS009)的专用试剂。化学发光法EMSA试剂盒中已经提供了适量的封闭液，但在某些需要使用较大量封闭液的情况下，可以购买本试剂用于化学发光法EMSA试剂盒的相关检测。
2012年08月份
BSA可以用来封闭，网上查到的浓度0.5%到2%都有，1%比较常见。孵育一抗之前要加，封闭孵育时间过后，加一抗之前不要洗掉，只移除多余液体即可.之后不需要再封闭，但是一抗和二抗都应该用含有BSA的缓冲液来稀释。有些人还加tween来减少非特异性结合。封闭抗原也可以使用二抗抗体所属动物种类的血清.没有统一固定的浓度要看情况。
2012年08月份
ELISA的试剂盒说明上写封闭液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点，蔗糖封闭的原理：ELISA实验中，蔗糖本身没有封闭作用，封闭液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
2012年07月份
预制Western Blots
2012年06月份
2012年04月份
定制单克隆抗体产品服务公司
2012年04月份
创新加油！生物医药创新第一歌—高圣之歌
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