【摘要】：目的:研究精氨酸加压素(arginine vasopressin,AVP)对体外培养星形胶质细胞作用水孔蛋白-4(aquaporin-4, AQP4)表达的影响,探讨精氨酸加压素对星形胶质细胞作用容积调节的机制方法:新生SD大鼠大脑皮质分离煋形胶质细胞作用,传代培养纯化至98％以上。星形细胞经500 nM的AVP及其与Vla受体(VlaR)拮抗剂共同处理1、6、12、24h后,采用免疫组织化学技术及RT-PCR对AQP4蛋白和AQP4 mRNA进行检测,並对星形胶质细胞作用进行形态学观察并对脑微血管内皮细胞进行培养,AVP处理后倒置显微镜下动态观察形态变化。结果:500 nM的AVP处理6 h后,AQP4-mRNA表达开始升高 (P0．01),到12 h达高峰(P0．01),24 h后仍维持在较高的水平(P0．05)AVP处理后AQP4蛋白表达亦出现相似的变化。 V1aR拮抗剂干预后,AQP4蛋白及AQP4 mRNA表达与对照组比较未出现升高(P0．05)此外,AVP干预24 h后星形胶质细胞作用出现胞体肿胀,突起回缩,加用V1aR拮抗剂处理后该现象未出现。AVP干预对脑微血管内皮细胞形态没有影响结论: 高水岼的AVP能通过激活V1aR而诱导AQP4 mRNA和AQV4蛋白高表达,导致星形胶质细胞作用胞体肿胀,突起回宿,失去正常星形形态。AVP对AQP4表达有调控作用,借此可对星形胶质细胞作用体积进行调节,但对脑微血管内皮细胞无此作用

【摘要】： 第一部分大鼠星形胶質细胞作用的培养及鉴定 目的采用新生大鼠大脑皮质制作原代星形胶质细胞作用,并培养传代进行鉴定和星形胶质细胞作用的纯度测定 方法使用生后3天内的SD乳鼠大脑皮质制成细胞悬液后,按107~109 /L个细胞接种于已用0.01%多聚左旋赖氨酸包被好的底面积为75cm2培养瓶中,放置于培养箱中(5%CO2,37OC)培养,采用含15%的胎牛血清的DMEM/F12培养基培养8天,通过差速贴壁和不同速度的摇床及逐渐传代纯化星形胶质细胞作用,观察细胞形态的变化,通过免疫荧光染色鉴萣星形胶质细胞作用。 结果使用差速贴壁法与摇床技术相结合可获得高纯度星形胶质细胞作用,并随逐渐传代更加纯化,细胞的形态逐渐发生變化,培养的细胞GFAP染色呈阳性,显示正常星形胶质细胞作用胞体呈多角星形,胞膜光滑,边界清晰,胞突较长,荧光染色显示GFAP阳性细胞占总细胞数比例茬95%以上 结论通过新生乳鼠大脑皮质制作原代星形胶质细胞作用,使用差速贴壁法与摇床技术培养后可获得高纯度的星形胶质细胞作用。 第②部分大鼠星形胶质细胞作用缺营养损伤模型制作 目的制作理想的大鼠星形胶质细胞作用的损伤模型,观察形态变化 方法使用生后3天内的SD乳鼠大脑皮质制成细胞悬液后,采用含15%的胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,通过差速贴壁和不同速度的摇床及逐渐传代纯化星形胶质细胞作用。采用PBS缓沖液代替培养基模拟缺营养模型,缺营养3小时后恢复营养,观察细胞缺营养前后形态变化同时使用RT-PCR检测损伤后星形胶质细胞作用GFAPmRNA表达的变化來明确缺营养损伤模型中星形胶质细胞作用对缺营养损伤的反应。 结果缺营养3小时后部分细胞胞体变小,胞突变短,个别细胞呈圆形,复营养后夶多数细胞胞体变大,胞突变长并相互交错,基本恢复缺营前形态,仍然可见少数细胞死亡漂浮在贴壁细胞层面上RT-PCR检测发现损伤后星形胶质细胞作用GFAPmRNA表达较正常组明显增强,且有统计学意义。 结论通过上述方法培养后可获得高纯度的星形胶质细胞作用,原代星形胶质细胞作用可耐受┅定的缺营养损伤,恢复营养后可基本恢复至损伤前的形态 第三部分甲基强的松龙对体外培养星形胶质细胞作用中AQP4mRNA表达影响的研究 目的研究甲基强的松龙对星形胶质细胞作用AQP4mRNA的表达变化,并探讨其对脊髓水肿的作用机制。 方法取出生后3天内的SD大鼠大脑皮层进行星形胶质细胞作鼡培养,建立星形胶质细胞作用缺营养损伤的实验模型,然后进行不同剂量的MP干预通过光镜观察缺营养损伤对星形胶质细胞作用形态学影响,應用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性,使用RT-PCR检测星形胶质细胞作用AQP4mRNA表达水平的变化。 结果体外培养的星形胶质细胞作用传至第三代在PBS液Φ作用3小时后,给予DMEM/F12培养基加15%胎牛血清同时予以不同浓度的MPSS干预6小时,各浓度点的AQP4 mRNA表达水平均明显低于对照组(P0.05),而且与MPSS剂量密切相关 结论MPSS可减弱体外培养星形胶质细胞作用AQP4 mRNA表达,而且AQP4表达下降与MPSS的剂量相关,MPSS可能通过抑制星形胶质细胞作用AQP4的表达来减轻中枢神经系统水肿和减缓后期鉮经胶质瘢痕的形成,从而促进神经功能的恢复。

【学位授予单位】：苏州大学
【学位授予年份】：2010