废碱液测定S含量时,为什么要稀释样品,为什么不直接测
直接测量,由于浓度大,平衡移动大,误差比较大,得到的数据不一定准确...稀释以后比较准确
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稀释后浓度虽小，但检验的精确度高了，算出来的结果乘以稀释倍数就是结果，否则太浓的话得到的只是一个范围，精确度变底了，和平衡没多大关系
扫描下载二维码ELISA同一样品，稀释倍数越高，得到结果越大？为嘛？ - 实验交流 - 生物秀
标题: ELISA同一样品，稀释倍数越高，得到结果越大？为嘛？
摘要: [ELISA同一样品，稀释倍数越高，得到结果越大？为嘛？] ELISA检测血清样品中蛋白含量。常规过程。同一样品不同稀释倍数得到结果差别较大，并且是随着稀释倍数越大越大，根据标准曲线计算出的结果就越大，这是什么个情况？PS：之前也有碰到过，以为是稀释时混合不够均匀的问题，后一段时间没做，这次的结果又出现在这个问题。之前做倍比稀释，这次是3倍稀释。Sam 关键词:[稀释倍数 标准曲线 小鼠 血清 稀释 抗体 标准品]……
ELISA检测血清样品中蛋白含量。常规过程。
同一样品不同稀释倍数得到结果差别较大，并且是随着稀释倍数越大越大，根据标准曲线计算出的结果就越大，这是什么个情况？
PS：之前也有碰到过，以为是稀释时混合不够均匀的问题，后一段时间没做，这次的结果又出现在这个问题。之前做倍比稀释，这次是3倍稀释。
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百思不得其解啊。。谁能给些意见建议，先在此谢过啦~:tuzi6:回复抗原抗体结合存在有最佳比例关系。
如果抗原（或抗体）初始浓度太高，抗原与抗体之间的浓度差别过大，就会出现如此现象。随着进一步的稀释，便会出现关系曲线。当浓度低于一定范围，反应关系消失。
所以，Elisa检测的线性关系，仅适用于一定的浓度范围。回复标准曲线是自己做的吗？你测的血清样品中的蛋白是什么物质啊？是血清中本来就有的东西还是输入动物体内的啊？楼主没有说明白啊。回复
抗原抗体结合存在有最佳比例关系。
如果抗原（或抗体）初始浓度太高，抗原与抗体之间的浓度差别过大，就会出现如此现象。随着进一步的稀释，便会出现关系曲线。当浓度低于一定范围，反应关系消失。
所以，Elisa ... ELISA体系是之前实验人员建立的，标准曲线采用软件进行四参数拟合，举例如图。
又想了想出现上述情况可能的原因：
1、样品稀释
2、从低浓度到高浓度加样，不换枪头
3、标准曲线的形状。落在高吸光值区间，稍一点偏差对结果影响就很大。因此在稀释倍数准确的情况下，落在标准曲线变化急剧区域数据更准确。即吸光值小的部分结果准确。
1、2现在基本可以排除。这两次进行了自认为非常充分的稀释过程。之前加样也是低浓度到高浓度不换枪头。所以，3的可能性比较大。
标准曲线是自己做的吗？你测的血清样品中的蛋白是什么物质啊？是血清中本来就有的东西还是输入动物体内的啊？楼主没有说明白啊。 目的蛋白是类似于人抗体的蛋白，小鼠血清中本没有。小鼠给药后，采血取血清进行ELISA检测。
标准曲线是用KC Junior软件进行四参数拟合的结果。4楼附上了标准曲线的例子。
回复十一点半了，罪过罪过~好好睡觉才是王道。:tuzi8:回复
目的蛋白是类似于人抗体的蛋白，小鼠血清中本没有。小鼠给药后，采血取血清进行ELISA检测。
标准曲线是用KC Junior软件进行四参数拟合的结果。4楼附上了标准曲线的例子。
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... 1.你的稀释倍数是根据理论血药浓度推算的吗？
2.这个情况的可能原因是你给小鼠注射药后，药物在体内产生了抗药性抗体，在这种情况下是稀释倍数越大，值越高。
3.还有一种情况是你用的这个方法有HOOK效应，在这种情况下也是稀释倍数越大，值越高，但是当稀释倍数够大，这种效应就不会影响到结果。回复
1.你的稀释倍数是根据理论血药浓度推算的吗？
2.这个情况的可能原因是你给小鼠注射药后，药物在体内产生了抗药性抗体，在这种情况下是稀释倍数越大，值越高。
3.还有一种情况是你用的这个方法有HOOK效应，在这种 ... 初涉这个领域，很多东西都不太了解。还请多多赐教。先在此谢过~
1、关于理论血药浓度与我的稀释倍数：
实验采用ICR小鼠，给药剂量为5mg蛋白/kg体重，药液体积为100ul/20g体重，皮内注射。于注射后0.5h、1h、2h、4h、6h、24h等取血。不知该如何计算理论血药浓度，是根据小鼠全血量和皮内注射这种给药方式的利用度吗？
我的稀释倍数是参考之前做其他蛋白皮内给药时的经验稀释倍数。但第一次做的时候，稀释倍数过大（从100X、200X开始做倍比），做8个倍比稀释只有1~2个倍数在标准曲线范围内甚至会全部梯度超限。因此后续实验调整了稀释倍数，从20X开始做倍比。
2、抗药性抗体：
小鼠都只给过一次药物。在48h采血时，已经能产生抗体了吗？
为什么产生抗药性抗体后，ELISA检测时，稀释倍数大，值就越高呢？
我该如何检测是不是产生了抗药性抗体呢？
3、HOOK效应：
先百度学习了下此效应。。此效应是说明标准曲线的浓度梯度设计不合理吗？标准品的浓度偏高了？
这个ELISA方法是从别人手中接过来直接重复的，只知操作，思考不足。。回复
初涉这个领域，很多东西都不太了解。还请多多赐教。先在此谢过~
1、关于理论血药浓度与我的稀释倍数：
实验采用ICR小鼠，给药剂量为5mg蛋白/kg体重，药液体积为100ul/20g体重，皮内注射。于注射后0.5h、1h、2h、 ... 实验采用的是双抗夹心的方法回复
初涉这个领域，很多东西都不太了解。还请多多赐教。先在此谢过~
1、关于理论血药浓度与我的稀释倍数：
实验采用ICR小鼠，给药剂量为5mg蛋白/kg体重，药液体积为100ul/20g体重，皮内注射。于注射后0.5h、1h、2h、 ... 1、标准品浓度稍做调整之后标准曲线见附图，之前从500ng/ml开始，现在的是从300ng/ml开始。标准曲线只是出现了S曲线的上半段，是不是意味着可以在将标准品浓度降低，尽量延长其线性区间？（现在的直线范围可视为0.03-0.1，或者0.03-0.13.）
2、样品的结果，见附图
选择OD值落在0.03-0.13之间的数据。这样结果可信么？
初涉这个领域，很多东西都不太了解。还请多多赐教。先在此谢过~
1、关于理论血药浓度与我的稀释倍数：
实验采用ICR小鼠，给药剂量为5mg蛋白/kg体重，药液体积为100ul/20g体重，皮内注射。于注射后0.5h、1h、2h、 ... 1、标准品浓度稍做调整之后标准曲线见附图，之前从500ng/ml开始，现在的是从300ng/ml开始。标准曲线只是出现了S曲线的上半段，是不是意味着可以在将标准品浓度降低，尽量延长其线性区间？（现在的直线范围可视为0.03-0.1，或者0.03-0.13.）
2、样品的结果，见附图
选择OD值落在0.03-0.13之间的数据。这样结果可信么？
1、标准品浓度稍做调整之后标准曲线见附图，之前从500ng/ml开始，现在的是从300ng/ml开始。标准曲线只是出现了S曲线的上半段，是不是意味着可以在将标准品浓度降低，尽量延长其线性区间？（现在的直线范围可视为0. ... 1.你将标曲图纵坐标用线性，横坐标用log，这样得到的图是S形曲线。
2.你的标曲的OD值范围和定量范围分别是多少？看你的标曲图感觉准确度挺低的，应该测得的点基本都在标线上。回复
初涉这个领域，很多东西都不太了解。还请多多赐教。先在此谢过~
1、关于理论血药浓度与我的稀释倍数：
实验采用ICR小鼠，给药剂量为5mg蛋白/kg体重，药液体积为100ul/20g体重，皮内注射。于注射后0.5h、1h、2h、 ... 1.小鼠的理论血药浓度为：5mg/kg:58.5ml/kg再乘以F（利用度），58.5ml/kg是小鼠的血容量，得到0.08547×Fmg/ml就是小鼠体内的血药浓度。
2.你的实验一共就采集到48h，应该没有抗药性抗体产生。
3.HOOK效应你可以验证一下，方法：做10×ULOQ，100×ULOQ，1000×ULOQ,测定这几个浓度的OD值，如果随着浓度增大而OD降低就表明有HOOK效应。（ULOQ就是你的最高定量限）回复
1.你将标曲图纵坐标用线性，横坐标用log，这样得到的图是S形曲线。
2.你的标曲的OD值范围和定量范围分别是多少？看你的标曲图感觉准确度挺低的，应该测得的点基本都在标线上。... 昨天将标准品浓度范围扩大，做了标准曲线，横坐标用log，纵坐标用线性。
浓度设置、OD以及标准曲线如下：
1、常规S曲线是指以横坐标浓度用log，纵坐标OD用线性吗？我看我们这边软件上设置的相反的，横标准用的线性，纵坐标log了。哪种方式是对的呢？
2、做出来S曲线的线性范围可以视作300~18.75吗？
1.你将标曲图纵坐标用线性，横坐标用log，这样得到的图是S形曲线。
2.你的标曲的OD值范围和定量范围分别是多少？看你的标曲图感觉准确度挺低的，应该测得的点基本都在标线上。... 另将之前的数据采用横log纵线性处理了下，也是类似线性的关系。
但是，样品不同稀释倍数间数值存在差别这个问题还是存在。可能是稀释倍数的影响，或者是样品中血清的影响。
我现在做的消除血清干扰的方法：在标准品的稀释的过程中引入血清作为内标，比如20X稀释（这个稀释倍数尽量与样品的第一个稀释倍数相同），10STD+10血清+180稀释液，目的在于采用血清替换标准品溶液环境。后续稀释与标准品相同，采用倍比稀释。作为内标。结果处理：根据标准曲线拟合出的方程和内标的OD，给出内标的计算值。用计算值除以实值，得出一个系数。回复
另将之前的数据采用横log纵线性处理了下，也是类似线性的关系。
但是，样品不同稀释倍数间数值存在差别这个问题还是存在。可能是稀释倍数的影响，或者是样品中血清的影响。
我现在做的消除血清干扰的方法：在标准 ... 刚才没打完，错点了回复。。
样品的计算值除以这个系数，作为最后的结果。
但是，内标不同稀释倍数间也是有差别的。如果标准曲线可靠的话，这是不是血清的影响呢？血清的影响该如何消除呢？
附图：内标与同板标准曲线（横log纵线性重新处理）。这个是之前的结果。
回复你的试剂盒是用的夹心法，还是竞争法啊？竞争法的话这种情况很正常啊！
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电话：021-溶液的稀释倍数怎么算?比如说去5克样品放到25ML容量瓶定容后,在移3ml到20ml容量瓶定容.再移5ml到50ml容量瓶,这过程中溶液稀释了几倍?具体公式是怎么样算的?不要直接答案,
柒月丿へ侵
(20/3)*(50/5)=200/3倍这过程中溶液一共稀释了200/3倍移3ml到20ml容量瓶定容,意思是把3ml溶液加水至体积为20ml,稀释了20/3再移5ml到50ml容量瓶,（这个也应该定容吧?你题目里没说）如果也定容,就是加水至体积为50ml,又稀释了50/5所以这过程中溶液一共稀释了200/3倍
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很简单。第一个过程，5克到25毫升，那它的质量分数为5/30；再取3毫升，那就是说取了3/6克的样品，那它的质量分数为0.5/20.5；取5毫升，那就是质量为2.5/20.5克的物质，放到50毫升里，质量分数为0.0025。再把过程除一下就行了。没有公式计算，最好是一步一步计算。...
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