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【求助】SOD,MDA的检测
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请问一下，我们平时测SOD和MDA时，可以选择用血清或者是组织匀浆，请问二者的区别？谢谢
不知道邀请谁？试试他们
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丁香园版主
看看二者的代谢途径就知道了。主要看你关注这些指标做何用？
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用的不是试剂盒吗？说明书上应该有吧，一般组织匀浆是需要测蛋白浓度的，血清则不需要
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:哦哦，谢谢
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中国科学院研究生院权威支持(北京)　电 话：010-　传 真：010-丙二醛(MDA)含量的测定；丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和；双组分分光光度计法据朗伯一比尔定律：D＝kCL，；已知蔗糖与TBA显色反应产物在450nm和532；C1＝11．71D450；C2＝6．45(D532-D600)-0.56D；式中：C1----可溶性糖的浓度(mmol?L-；仪器设备：紫外可见分光光度计1台；离心机1台；电；MDA
丙二醛(MDA)含量的测定
丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3，5，5―三甲基恶唑-2，4。二酮)，其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA―TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。
双组分分光光度计法 据朗伯一比尔定律：D＝kCL，当液层厚度为1cm时，kD／C，k称为该物质的比吸收系数。当某一溶液中有数种吸光物质时，某一波长下的消光度值等于此混合液在该波长下各显色物质的消光度之和。
已知蔗糖与TBA显色反应产物在450nm和532nm波长下的比吸收系数分别为85．40、7．40。 MDA在450nm波长下无吸收，故该波长的比吸收系数为0，532nm波长下的比吸系数为155。根据双组分分光度计法建立方程组，求解方程得计算公式：
C1＝11．71D450
C2＝6．45(D532-D600)-0.56D450
C1----可溶性糖的浓度(mmol?L-1) C2----MDA的浓度（?umol?L-1）
D450、D532、D600分别代表450、532和600nm波长下的消光度值。
仪器设备：紫外可见分光光度计1台；离心机1台；电子天平1台等。
试剂：10％三氯乙酸(TCA)；0．6％硫代巴比妥酸：先加少量的氢氧化钠(1mol?L-1)溶解，再用10％的三氯乙酸定容。
MDA提取方法
1、取10ml藻液，将藻液放入离心管中,4 000rP/min离心10 min ,弃上清液,藻体中加入1ml 预冷的0. 05 mol/L pH为7. 8的磷酸缓冲液,0～4 ℃下超声波破碎, 破碎液在 10000 rP/min
4℃离心机中离心30min ,上清液即为粗酶液。
2、显色反应和测定 测定管吸取离心的上清液0.2ml和1.8ml蒸馏水(对照加2ml蒸馏水)，加入2ml 0．6％TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应15min，迅速冷却后再在4000rP/min下离心10分钟。取上清液测定532、600和450nm波长下的消光度。
3、计算含量双组分分光光度法
C1＝11．71D450
C2＝6．45(D532-D600)-0.56D450
C1----可溶性糖的浓度(mmol?L-1) C2----MDA的浓度（?umol?L-1）D450、D532、D600分别代表450、532和600nm波长下的消光度值。
按公式可直接求得植物样品提取液中MDA的浓度。 用上述方法求得MDA的浓度，根据藻液体积计算测定藻液中MDA的含量。
MDA含量(umol?ml-1)＝C2×10×VL／N
N-----10ml藻液中细胞个数
VL-----粗酶液体积(1ml)
考马斯亮蓝法
1976年由Bradford建立的考马斯亮蓝法,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定方法之一。考马斯亮蓝G-20染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料最大吸收峰位置,由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.染料主要是与蛋白质中碱性氨基酸和芳香氨基酸残基结合。
在595nm下测定的吸光度D595,与蛋白质浓度成正比。
(1)标准蛋白质溶液,用牛血清蛋白 ,配制成1.0mg/ml和0.1mg/ml的标准蛋白质溶液。
(2)考马斯亮兰G-250染料试剂:称100mg考马斯亮兰G-250,溶于50ml 95%的乙醇后，再加入120ml85 %的磷酸,用水稀释至1L
器材：可见光分光光度计、旋涡混合器、指形管等。
(1)取10支试管,按表中顺序,分别加入蒸馏水和标准蛋白,即用1.0mg/ml的标准蛋白质溶液给个试管分别加入:0,0.01,0.02,0.04,0.06,0.08,0.1ml,然后用水补充到0.1ml最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮蓝G-250试剂。
(2)加完试剂2-5分钟后,即可开始用比色皿,在分光光度计上测定各样品在595nm处的光吸收值D595,空白对照为1号管。
注意:不可用石英比色皿(因不易洗去染料)
(3)用标准蛋白质(mg)为横坐标,用吸光值D595为纵坐标,作图 ,即得一标准曲线.由此标准曲线,根据测出的样品D595值,即可查出样品蛋白质含量。
测定管方法：
1、 取10ml藻液，将藻液放入离心管中,4 000rP/min离心10 min ,弃上清液,藻体中加入1ml 预冷的0. 05 mol/L pH为7. 8的磷酸缓冲液,0～4 ℃下超声波破碎, 破碎液在 10000 rP/min
4℃离心机中离心30min ,上清液即为粗酶液。
2、显色反应和测定
取粗酶液0.1mL(浓度高时用PBS稀释10倍）于指形管中，加入考马斯亮蓝溶液5mL，摇匀静置5min后测定D595
3、计算含量
利用标准曲线数据转换出含量。
SOD含量测定
取10ml藻液，将藻液放入离心管中,4 000rP/min离心10 min ,弃上清液,藻体中加入1ml 预冷的0. 05 mol/L pH为7. 8的磷酸缓冲液,0～4 ℃下超声波破碎, 破碎液在 10000 rP/min
4℃离心机中离心30min ,上清液即为粗酶液。
SOD活性测定
1.显色反应 取10mL指形管（要求透明度好）3支，1支为测定管，另2支为对照管，按表1C1加入各溶液。 混匀后，给1支对照管照上比试管稍长的双层黑色硬纸套遮光，与其他各管同时置于4000lx日光灯下反应20-30 min(要求各管照光情况一致，反应温度控制在25～35℃之间，使酶活性高低适当调整反应时间)。
当样品数量较大时，可在临用前根据用量将表1C1中各试剂(酶液和核黄素除外)按比例混合后一次加入2.65mL，然后依次加入核黄素和酶液，使终浓度不变。 表 1-1 各溶液显色反应用量
至反应结束后，用黑布罩盖上试管，终止反应。以遮光的对照管作为空白，分别在560nm下测定各管的OD值，计算SOD活性。
已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD活性。
（u/ml）?(D1-D2)?Vl0.5?D1?VC?V0
式中：SOD总活性以酶单位每毫升藻液表示。
D1 ――照光对照管的吸光度。
D2 ――样品管的吸光度。
VC――测定时样品用量，0.1mL。
Vl――样品液总体积，1mL。
0――样品体积10ml。
包含各类专业文献、生活休闲娱乐、应用写作文书、专业论文、中学教育、文学作品欣赏、97MDA SOD Pr测定方法等内容。　
　处的吸光度值, 并按公式计算 出 MDA 浓度,再计算出鲜量组织中的 MDA 含量...5.过氧化氢酶(CAT)活性测定粗酶液制备同 SOD。 方法一|(1)试剂配制: 0.... 　SOD_测定方法_农学_农林牧渔_专业资料。SOD 氮蓝四唑(NBT)法测定超氧物歧化...缩写:SOD:超氧化物歧化酶; CAT:过氧化氢酶; POD:过氧化物酶; MDA:丙二 ... 　SOD 测定方法_医药卫生_专业资料。SOD 氮蓝四唑(NBT)法测定超氧物歧化酶(...缩写:SOD:超氧化物歧化酶; CAT:过氧化氢酶; POD:过氧化物酶; MDA:丙二 ... 　将提取液于 10000 转/ 分冷冻离心 20 分钟,上清液用于测定 SOD, POD, CAT ...(min) MDA 取上清液 1.5m1, 加入 2.5m10.5%的硫代巴比妥酸(TBA)(用 10%三... 　g 的倍数 四、SOD 酶活性的测定 【实验材料】 叶片,用去离子水冲洗干净,充分...七、丙二醛(MDA)含量的测定 【实验材料】 植物叶片 【仪器设备与用品】 分光... 　各种酶活性测定方法第一 超氧化物歧化酶 SOD 测定 一、原理 超氧物歧化酶(...(2) 照光后至显蓝色要立即避光放置、迅速测定 A560 值 2.MDA 的测定方法 ... 　可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定 MDA 含量,用量可以定为 1.0、1.5 或...Met + NBT + EDTA-Na2 200mll+200ml+100ml SOD 酶测定时,酶液量 50μ... 　煮沸 10min 后离心比色测定,按陈贵推荐公式计算 MDA 含量; ③ 取上清液 10μ l,按朱广廉法测定 SOD 活性,以 SOD 抑制 NBT 光化学还原 50%所需酶 量为一... 　【MDA 的提取】 同 SOD 【MDA 含量的测定】 取上清液 1.5 ml 于 10ml 带塞试管中(对照管以 1.5 ml 蒸馏水代替提取液还是 PH7.8PBS) , 加入 0.5% TBA...关注今日：169 | 主题：475066
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【求助】求心肌细胞培养液比色法检测CKMB、MDA、SOD活力的具体步骤
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丁香园准中级站友
这个帖子发布于4年零225天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已解决悬赏丁当:10
细胞培养新手，求心肌细胞培养液比色法检测CKMB、MDA、SOD活力的具体步骤（越详细越好，也可推荐相关材料），有检测过CKMB、MDA、SOD相关指标的战友也可以分享检测过程的经验，比如检测培液的量，不同种类胎牛及培养液的影响，细胞密度如何保持一致，其他干扰因素的控制等，除采纳帖外，其他有参考意义的回帖本人也愿意投票及额外转让10个丁当。谢谢战友们的分享！
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这个自己在google scholar里面搜索一下就可以了：cardiomyocyte medium colorimetry SOD activitySOD的活性测定： 还可以参考一篇学位论文后面的参考文献 （注意不是该论文，是参考文献）： 利多卡因预处理对高糖孵育H9c2大鼠成肌细胞缺氧复氧损伤的影响
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丁香园准中级站友
freecell 这个自己在google scholar里面搜索一下就可以了：cardiomyocyte medium colorimetry SOD activitySOD的活性测定： 还可以参考一篇学位论文后面的参考文献 （注意不是该论文，是参考文献）： 利多卡因预处理对高糖孵育H9c2大鼠成肌细胞缺氧复氧损伤的影响多谢神通广大的freecell的回复
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2008wlz 细胞培养新手，求心肌细胞培养液比色法检测CKMB、MDA、SOD活力的具体步骤（越详细越好，也可推荐相关材料），有检测过CKMB、MDA、SOD相关指标的战友也可以分享检测过程的经验，比如检测培液的量，不同种类胎牛及培养液的影响，细胞密度如何保持一致，其他干扰因素的控制等，除采纳帖外，其他有参考意义的回帖本人也愿意投票及额外转让10个丁当。谢谢战友们的分享！请问前辈 您SOD
MDA测出来了吗 可以分享下你的操作步骤 及注意事项吗？我也想做，买了碧云天的试剂盒。先谢谢。
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