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如何测定植物提取物中的多糖？
请高手指教一下。我查了一下文献，发现很少，不知有没有人做过或知道？哪类的？香菇多糖，灵芝多糖，之类的检测方法都有，参考一下多糖的测定多采用比色法，其中硫酸―蒽酮比色法较为常用。其原理是：多糖在浓硫酸作用下，水解成单糖分子，并迅速脱水生成糖醛，然后糖醛与蒽酮缩合成糖醛衍生物，呈蓝绿色，颜色稳定，在(624±1)nm处有特征吸收，可测定多糖含量，结果较为准确。
温度、湿度，硫酸浓度是影响实验结果的重要因素。以室温20℃，湿度低于42％，98％浓硫酸及供试液与浓硫酸比为1：3，效果好。
0.2％的蒽酮试液不必现配，但冰箱贮存时，有少许晶体析出，必须等室温或微热溶解后再使用。植物中的总多糖。多糖是一类天然大分子化合物,,其药理作用广泛,参与动植物细胞的各种生命现象的调节。植物源的多糖类化合物由于它们的独特功能和很低的毒性,已经成为当今新药的发展方向之一。但正如kinginsun 兄所说其研究方法一直是一个难点,很困难哟!
其它生物高分子如蛋白质,核酸的研究方法很成型,主要是依靠蛋白质,核酸有特定的紫外吸收,在280,260nm下即可检测。多糖研究的困难就在于它无紫外吸收。一般的研究方法概括如下：1
将无紫外吸收的多糖与显色剂显色，产生紫外吸收，从而用紫外法定量。硫酸―苯酚法、硫酸―蒽酮法，3、5―二硝基水杨酸比色法测定总糖都是这种思路，硫酸―蒽酮法这皮皮兄已做了详细的说明，这里就不详述。2
直接测糖法，折光法测定多糖，主要是水溶性糖。原理是用折射计测得的折射指数值(糖度)代表着溶液中可溶性物质的含量高低，若溶液中的溶质是糖物质或以糖为主的糖物质,则折射指数值就反映着糖含量的高低。方法：提取植物水溶性多糖,滤液以折射计测折光指数,并代入Ｙ=-0.4Ｘ(以葡萄糖计)计算粗多糖含量。对于纯糖水溶液定量准确性优于衍生显色法。3
多糖检测的HPLC法也是基于上面的思路，要么衍生化后使用紫外或荧光检测器，要么使用通用型检测器，这类检测器主要有示差检测器（其原理同折光法测定多糖），蒸发光检测器。示差检测器较蒸发光检测器普及，但在唐测量方面不及蒸发光检测器，这里就不细讲拉。如果有条件，蒸发光检测器是糖测量最为理想的HPLC检测器。有条件的话也可以用毛细管电泳试试，紫外检测或是荧光检测，直接或间接测定，能够衍生最好，可以提高灵敏度。我想问问寡糖如何测定？谢谢了下面对楼上yxssmaster 提到的蒸发光散射仪做一个简单介绍：蒸发式光散射检测器简介适合：液相色谱、凝胶色谱、高温凝胶色谱、高速逆流色谱应用领域：药物&&类脂化合物&&碳水化合物
蛋白质&&多肽
&&甘油三酯
&&表面活性剂&&多糖PL-ELS1000是最新型的气化式光散射浓度检测器。作为通用型检测器，可应用于各种液相色谱、凝胶色谱，它的研究及生产主要是为了弥补一般常用UV及RI色谱检测器不足及弱点，务求为研究人员提供最方便，可靠及准确的操作，对研究工作带来突破性的高效率进度。相对于UV及RI检测器，PL-ELS1000主要之优点如下：相对UV：
1.&&可测量含有或不含UV色基的高聚物；2.&&溶剂无须UV透明；3.&&基线稳定，无论使用梯度溶剂流量或挥发性离子配对剂；4.&&可选择更多类有机溶剂；5.&&检测不受样品官能团影响，可检测不含紫外吸收基团的聚合物、中药组分（如人参皂甙、银杏内脂）等。相对RI：1.&&可更快稳定；2.&&使用更容易；3.&&加倍灵敏度；4.&&稳定，绝无基线漂移；5.&&正峰输出无须担心正负峰之问题；6.&&不受室温影响；7.&&可作梯度流速操作；8.&&无溶剂峰。操作原理
首先溶剂会被雾化成点状，这个过程一般是使用压缩空气进行的，可使用压缩空气或其他惰性气体，然后再通过一个管状加热器使之气化。
因为溶质较溶剂的挥发性低，所以溶质会以微粒与平行光源相交，而使光线产生散射现象。散射光线由高灵敏的光电倍增检测察器测量，所以输出的是与溶质的浓度成正比电压信号。全新PL-ELS1000的操作优点：l&&灵敏度大大提升：小于1ng，线性及重复性好；l&&低温操作：现在最典型的温度范围是从室温至50℃，对检测有机溶机剂中的高挥发性物质有极大作用；l&&低气体流量：只需1.5L/min；l&&使用空压机产生的压缩气体作雾化，经济和方便；l&&基线非常稳定，绝无漂移；l&&启动时间只须数分钟；l&&唯一一台系统使用可控制加热输送线，支持中温或高温GPC操作；l&&最广阔的温度范围：室温-350℃；l&&符合欧洲CE标准，设有多项安全设计包括独立气体及温度监察器；l&&体积细小，方便配合实验室操作。PL-ELS1000在色谱分析上的优点l&&对任何不挥发之溶质，均产生峰值；l&&输出不受溶质的化学特性或类别影响；l&&输出不受溶剂影响，无论使用梯度溶剂流量或加上UV吸收剂；l&&基线保持平稳，绝无飘移；l&&消除溶剂对色谱图的干扰。GPC/SEC应用
一般来说，高聚物都具有低挥发性及缺少紫外光色基，PL-ELS1000是一台非常出色及理想的凝胶色谱检测器。PL-ELS1000具有极高的讯号对噪音比例，较传统的折光检测器为佳，这对于检测折光指数比增（du/dc）较小的样品非常有价值。高温GPC/SEC分析由于室温状态下许多高聚物溶解后，粘度相当高甚至不溶解，所以把温度升高使粘度降低是普遍的做法。在许多极化的溶剂里，都会放一点浓度的矿物盐用以控制离子的相互反应，在PL-ELS1000的操作中，客户可加入挥发性高的矿物如亚摩尼亚乙酸盐或亚甲酸盐等，代替挥发性低的矿盐。高分子混合物的凝胶色谱分析高聚物的折光指数可以是正或负，只视乎不同的溶剂，所以当两类不同的高聚混合或共聚合在一起，折光仪通常都不能用作检测器，因为正负峰会同时出现，但PL-ELS1000只会输出正峰所以对这类共聚物或混合物的分析非常有效。超高温GPC/SEC之应用
现代之工程高分子材料发展一日千里，世界各地正积极研究开发，以配合各种不同之应用范围，与此同时，亦制造出许多溶解温度高的样品，使高温GPC/SEC之应用渐趋普及，到现在为止，只有聚合物实验室（Polymer Laboratories）能提供真正的超高温凝胶色谱技术，这可帮助解决分析高结晶度之聚烯材料，达到高温分析要求。为配合这方面之需要，PL的加热输送线更可把溶剂从GPC210直接送到PL-ELS1000进行检测，温度可高达220℃，防止样品在中途凝固，并全由PL-ELS1000主机控制，操作方便，尽管是最难的高温凝胶色谱分析，PL-ELS1000亦应付自如。操作更简便使用灵活快捷PL-ELS1000安装极为方便，体积轻巧，能配合实验室的工作环境，简明用户手册提供相应资料，配合液晶显示屏及键板，用户可灵活操作及输入各种参数。维护频率减轻PL-ELS1000的特别设计可将内壁的污染减至最低，确保仪器的长久适用及免维护操作。PL-ELS1000的另一特点是流动相可全通过检测器，无须依靠雾化器的虹吸管，可省除清洗之费时失事。安全及品质保证
PL非常重视安全及品质的重要性，这是现代研究实验室的基本要素。PL-ELS1000如其他PL的产品一样都是坚守着这方面的原则而设计制造。PL-ELS1000已取得欧洲认可的CE标签，符合电机设备之安全规定承诺的优良工程传统；另外PL-ELS1000亦符合EMC的电磁兼容性规定，确保PL-ELS1000不会对其他设备操作构成影响。为了更佳的保护效果，温度及气体流量都是由独并的安全电路监察，需要时可把加热器立即关掉。技术指标：光源：
&&钨/卤素灯检测器：
&&光电二极管温度范围： 汽化温度：&&40至350℃雾化温度：&&40至220℃热连接线温度：&&40至250℃（选件）气体流量： &&0-2 L/min，气体压力60psi流相流速：
&&0.1-2ml/min（非水溶性）0.1-&&1ml/min（水溶性）模拟输出：&&0-1V 或0-10V通讯：&&串行（RS 232） I/O&&&&PC控制&&&&远程自动回零输入&&&&红外遥控器
&&TTL +ve/-ve
控制加热输送线&&&&操作参数：选择及显示：&&液晶显示及控制面板检测状态：
&&电源，就绪，错误，准备指示灯，独立安全断路器控制：
&&微处理器尺寸：
&&430(高)×175(阔)×480(厚)mm注：我们现在用的是alltech 的蒸发光散射仪，与上面提到的PL-ELS1000区别是：alltech用的光源是激光。findcj 兄用的是alltech ELSD 500 还是 2000, 我原来只用过500,不知2000怎样,如果findcj 兄用的是 2000,可否谈谈使用手记与心得.谢谢yxssmaster 兄，我们用的是2000型的，主要是在生产银杏内脂（A、B、C、J）、白果内脂时用于检测，因为不是我具体操作，谈不上什么心得。我想还是邀请ALLTECH公司的专家上来谈谈他们、800三个型号的机器吧。不知道yxssmaster君是否用过ELSD来检测多糖，如果有的话，很想听你介绍一下心得我原来用的是ALLTECH，ELSD 500，不限于分多糖，什么都做。这里附上我写的ALLTECH，ELSD 500的操作流程。希望对大家有用。
ALLTECH “426 HPLC PUMP-500 ELSD ”使用手册1
检查色谱系统(426 HPLC pump,500 ELSD, computer workstation)的供电是否正常。2
将色谱柱、储有流动相的储液瓶接入色谱系统，检查色谱系统流动相管路的连接是否正确及500ELSD氮气通路连接是否正确。3．打开氮气钢瓶总气阀，调节分压阀，使钢瓶输出气压表盘读数在0.28-0.56 MPa之间。4．打开500ELSD电源，根据流动相流速和流动相组成调节雾化器氮气流量(GAS FLOW)和漂移管温度(DRIFT TUBE TEMP)。
待“GAS FLOW”和“DRIFT TUBE TEMP”显示稳定在设定值时，打开426 HPLC pump电源开关，设定流动相流速（标准分析流速1.00ml/min），启动泵“RUN/STOP”。6.
打开计算机，进入色谱工作站，监测(preview)基线。7.
待基线稳定后，在500ELSD前面板上按下“AUTO ZERO”等待2秒后，进样，记录色谱信号。8.
使用完毕后，用甲醇冲洗色谱柱30min至基线稳定。9.
退出色谱工作站，停泵（RUN/STOP），关闭426HPLC pump，等待数分钟，以使500ELSD中残留流动相完全排尽。待500ELSD排气管温度(EXHAUST TEMP)降至100℃以下。关闭500ELSD主机电源。关闭氮气钢瓶总阀。清除500ELSD冷肼中冷凝的废液。10.
拆卸色谱柱，用柱堵头封住色谱柱两头，以防色谱柱中溶剂挥开。谢谢yxssmaster君的赐教，您的经验对我们大家会有用的。
但我还想问一下，不知道您用ELSD做过多糖的检测没有，最近我有个朋友想做黄芪多糖，不想做总多糖，而是做具体的成分，所以不打算使用比色法。于是考虑使用ELSD，不知道其可行性。希望能听听你的意见我没用ELSD做过多糖，但用他检测多糖具体的成分，肯定是相当棒的选择！！ （如果有条件的话）。其实我的感受，但从检测器的角度，ELSD用于什么物质都一样，ELSD真的很好，质量相关，可以梯度，但灵敏度较紫外稍逊（强于示差）。我做ELSD有些体会，皮皮兄见笑了！1. 因为使用500ELSD检测器，所以在使用含缓冲盐及难挥发溶剂（如乙酸）作流动相时，要谨慎，应参阅500ELSD说明书，以决定是否可以采用该流动相及如何设置500ELSD的参数。2 主要要优化的参数是 雾化器氮气流量,漂移管温度, 流动相流速附：流动相为1ml/min时，雾化器氮气流量和漂移管温度与流动相组成的关系。
单一流动相
雾化器氮气流量
漂移管温度
混合流动相:
按流动相中混合溶剂的比率、计算混合流动相所需的雾化器气体流量和漂移管温度。例如以60%甲醇/水为流动相，其漂移管气体流量=(.60)(1.65)+(.40)(3.20)=2.27 SLPM; 其漂移管温度=(.60)(70)+(.40)(115)=88 ℃
当进行梯度分离时，根据流动相中最低挥发性的溶剂决定雾化器气体流量和漂移管温度。
注：提高流动相流速，则应相应提高雾化器氮气流量和漂移管温度；降低流动相流速，则应相应降低雾化器氮气流量和漂移管温度。3. 500ELSD 分析标准流动相流速为1ml/min，若要使用大于或小于1ml/min的流速，则应参考500ELSD说明书优化雾化器氮气流量及漂移管温度。4. 每次使用完毕，应及时倒空500ELSD冷肼中冷凝的废液，若冷肼中废液积满，会影响尾气排放，造成基线噪音增加。维谱有一篇关于ELSD在多糖分析的文章。希望对皮皮 兄有用
糖分析.vip (91.17k)谢谢yxssmaster君的赐教，很高兴能分享您在ELSD方面的心得！多糖的检测是一个难点，我也一直很希望在这方面做些研究，正好有这个机会。等我朋友做了以后，我会和大家一起分享经验的再次感谢！多糖的分析是不能用书上和目前的文献方法的硫酸-苯酚法是最简单的，也最实用。但是所有的文献和书本都是测量均一多糖，而植物多糖往往是杂多糖注意：杂多糖和均仪多糖的测量是完全不一样的主要区别在于标准曲线，均一多糖可以用Glu,或者Man做杂多糖必须用混合标准曲线，混合的曲线比例由GC确定一切都源于不同单糖用通常的比色法测定时，相同C其A不一样对于这，本人刚完成一篇文章，已经投稿，也许过几天会发表出来告诉大家有人说用HPLC和GC测多糖，本人也就次做过探讨，结果发现其误差是很大的就算加了内标也是不可取的，误差大大地有意做的话用硫酸-苯酚法测定多糖时,如果该多糖溶液中有大量单糖,二糖或低聚糖存在,会干扰多糖的测定吗?如果干扰的话 ,如何除去呢?请赐教当然回干扰了从硫酸-苯酚的原理可以看出是硫酸把糖环氧化成了糠醛，进而和本分显色所以干扰是很大的，要除去大量单糖，可以透析，凝胶柱纯化等。另外在测多糖的时候要先把多糖经过盐酸水解2小时，因为你用的标准曲线一般都是单糖，而测量用的却是样品多糖，这样测出来的结果会有比较大的误差。但是如果你对你测量的多糖比较熟悉，原来曾经用水解法做过，计算出其校正系数，那么你可以省去水解这一步。还有测量前要用GC衍生法先测糖组分，否则误差可能会很大甚至达到100%或者更多。谢谢各位指教，我目前也作过多糖检测，是海参酸性粘多糖，用的是硫酸-苯酚法，以现在的说法我测的肯定不准确。希望能找出更好的方法。我测过卡介菌多糖，采用的是紫外分光度法方法，很准确用蔗糖作对照品。具体方法见生物制品规程2000版。看了大家的讨论学到了不少东西。非常好，目前正在作关于天然多糖，多糖模拟物，植物提取多糖的一些研究，关注此贴。如何区分小分子糖（单糖和寡糖）与多糖，其实文献上已经很多。就是采用80%乙醇处理。因为前者可以溶于80%乙醇，后者则不溶。通过此法将两者分离，在分别测定含量就不会有干扰了。具体做法两种：1。一种是将提取物（或生药 ）用80%乙醇提取，提取液得到小分子糖，提取后的残余物在用水提，得到多糖。2。 江提取物的溶液加乙醇至80%，得到上清液为小分子糖，沉淀再用水溶解极为多糖。要测定产品中的多糖.如何去除麦芽糊精的干扰.我测的结果往往是超过100%呀.I am in Uzbekistan and studying polysacchride in plant,mainly focus on the isolation and
chemical structure linkage identification. It is time consuming !严重关注good!多糖在测定含量时,计算公式中有稀释因素D是怎么计算的,比如提取液总体积是200ml,丛中取出1ml定容到100ml,取此稀释液1ml加入4ml蒽酮-硫酸试剂测定,那么稀释因素是多少呢?
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