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问题已解决悬赏丁当:60
目前正在做宫颈癌的免疫组化，因为第一次做，所以很多东西都不了解。我正打算取病例50，正常10，但在取病例时发现存在这样的问题，就是我该如何去找病例，我设计的指标很多，包括有多种分组，如FIGO分期，分化程度，有无淋巴结转移等，但不管如何，其实最主要的是找到一个界定癌的指标，就是区分出癌的级别，比如我要研究的因子与癌的等级是正相关的，我想观察从低级别的癌到高级别的癌其染色强度的差异，但因为没临床过，仅仅大三五年制本科学生，所以考虑的很多是否具有可行性都值得商榷的，想在这里向各位老师请教，我该如何选取病例才好呢？回答请不少于五十字，否则不考虑给予奖励，奖励很丰厚的！
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红楼梦非梦 目前正在做宫颈癌的免疫组化，因为第一次做，所以很多东西都不了解。我正打算取病例50，正常10，但在取病例时发现存在这样的问题，就是我该如何去找病例，我设计的指标很多，包括有多种分组，如FIGO分期，分化程度，有无淋巴结转移等，但不管如何，其实最主要的是找到一个界定癌的指标，就是区分出癌的级别，比如我要研究的因子与癌的等级是正相关的，我想观察从低级别的癌到高级别的癌其染色强度的差异，但因为没临床过，仅仅大三五年制本科学生，所以考虑的很多是否具有可行性都值得商榷的，想在这里向各位老师请教，我该如何选取病例才好呢？回答请不少于五十字，否则不考虑给予奖励，奖励很丰厚的！50例这样可能有点少，如果需要区分从低级别的癌到高级别的癌其染色强度的差异，最好可以选择上皮内瘤变、原位癌、低级别、高级别，每个癌选取20-30例，这样的话就可以了同时，还应该考虑每个肿瘤标本的病理分级或临床分期，可能你想表达的是分期越高（越晚期）那个因子越强，所以也可以按照临床分期分组，当然，两个都有最好
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红楼梦非梦 目前正在做宫颈癌的免疫组化，因为第一次做，所以很多东西都不了解。我正打算取病例50，正常10，但在取病例时发现存在这样的问题，就是我该如何去找病例，我设计的指标很多，包括有多种分组，如FIGO分期，分化程度，有无淋巴结转移等，但不管如何，其实最主要的是找到一个界定癌的指标，就是区分出癌的级别，比如我要研究的因子与癌的等级是正相关的，我想观察从低级别的癌到高级别的癌其染色强度的差异，但因为没临床过，仅仅大三五年制本科学生，所以考虑的很多是否具有可行性都值得商榷的，想在这里向各位老师请教，我该如何选取病例才好呢？回答请不少于五十字，否则不考虑给予奖励，奖励很丰厚的！50例这样可能有点少，如果需要区分从低级别的癌到高级别的癌其染色强度的差异，最好可以选择上皮内瘤变、原位癌、低级别、高级别，每个癌选取20-30例，这样的话就可以了同时，还应该考虑每个肿瘤标本的病理分级或临床分期，可能你想表达的是分期越高（越晚期）那个因子越强，所以也可以按照临床分期分组，当然，两个都有最好
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扩大样本量，随机收集标本。“我想观察从低级别的癌到高级别的癌其染色强度的差异？”建议去下载几篇免疫组化文章进行了解。
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太复杂了。。。没看懂。。。
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大概理解为您要做的是免疫组化观察某种蛋白表达（或者你说的因子），该蛋白的浓度（或者你说的因子）可以明确通过染色的浅深差异来区别。你要观察从低分化细胞到高分化细胞中染色强度的差异。 是这个意思吗？
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你这个实验必须有医院病理科的技术支持和标本支持，否则你根本没有完成的可能，给你一块组织标本你切片都不会，怎么做免疫组化？病例有点偏少，先取得标本，请别人给你前期做好标本处理，切好片子，后面的免疫组化你可以自己做，然后根据标本去病案室查临床资料，统计好，根据你做的免疫组化片子的结果把数据先列出了，然后去你们学校找老师或者统计教研室的人给你建议哪些数据分别用什么统计学方法。这些估计你现在都还不懂。多学学，多问问。查几篇类似的文献看看，文献检索应该会吧，这个实验你做好了再加点分子生物学的实验都够研究生毕业了。你在这问是远远不够的。
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经费有限，我能支配的大概仅有一万三左右，难以扩大样本量，目前已经选好了病例，宫颈癌42例，宫颈上皮内瘤变20例，正常宫颈(慢性宫颈炎)20例，医院方面的支持不用担心，蜡块切片均来自于医院，综合型大医院。
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目前指标考虑的比较多，在选取病例时尽量选用了有明确FIGO分期的病例，同时病理分级也都具备，只是FIGO分期中III及以上仅数例，病理分级I级较少。由于抗体较贵，无法详细扩展到每个等级的癌都有一二十例，所以比较遗憾，最近打算补加一个随访，做生存分析，看看预后如何，预后主要针对癌及癌前病变病人，总共62例，勉强也能做生存分析了
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统计方法倒不用担心，这个完全能自己处理，我可以简单描述一下，主要对病理特征，如年龄、性别、淋巴结有无转移等做卡方，然后绘制ROC曲线描述其特征，对病理切片做染色强度及染色百分率综合评分（我没有使用常规的单一评分法），使用sperman分析，然后进行两两比较，探讨在宫颈癌中两两的相关性，最后则是生存分析，通过看病人的死亡是否与病理切片上研究因子的高表达是否相关，从而进一步探讨目标因子对肿瘤预后的影响
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病例目前已选取好，现在还有的问题就是我如何进一步扩大成果，实验结果好坏暂时无法控制，只能通过对实验方法的严格遵从而尽量保证效果，因为样本量有限，从一开始就有不少问题，虽然想到补加了生存分析，但发SCI还是有难度，核心应该是没问题，不过因为这是进入大四前最后一个暑假，也是在考研前最有时间的一个假期，想多做点成果，所以还希望大家能理解并不是好高骛远。目前待发SCI一篇，meta分析一篇正在写作，导师目标SCI，再包括这个，如果幸运这个假期应该能完成三篇，当然太过理想化，目前只有待发那篇是没问题的（标注这些只是想让各位老师看到确实有一定实力来做好，别无他意），还请各位老师教教我在目前的情况下，在缺少经费的情况下我该如何进一步扩大成果呢？
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txawjvam edited on
60个丁当的奖励啊，没人感兴趣？？？
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再接着做分子生物学啊，养细胞，提rna，pcr,western,转染，流式细胞测细胞凋亡，既然冲着sci去的，再花个1_2万也值。这样既有分子水平，又有临床标本，结合临床资料，老外认这个。
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数据分析的时候样本量少不能只认卡方，可用确切概率法。
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先做预实验（短期可收到多少），根据预实验结果计算正式研究样本量
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根据预实验结果计算的宫颈癌样本量最好是96例左右，但因为经费紧张，实际癌42，癌前病变20，慢性宫颈炎20
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Fisher确切概率法该如何使用呢？能否详细说明
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txawjvamFisher确切概率法该如何使用呢？能否详细说明spss直接就出来了，你会用卡方就会用fisher确切概率。病例少，再结合临床资料分组可能会存在有些组病例数更少，甚至少于5。这个时候就不能用卡方。
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红楼梦非梦 经费有限，我能支配的大概仅有一万三左右，难以扩大样本量，目前已经选好了病例，宫颈癌42例，宫颈上皮内瘤变20例，正常宫颈(慢性宫颈炎)20例，医院方面的支持不用担心，蜡块切片均来自于医院，综合型大医院。一万三太少了，试剂都不够吧
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关于丁香园胃癌相关标志物免疫组化指标选择专家共识（2014）
来源：临床与实验病理学杂志
作者：薛卫成 樊祥山 孟刚
2014 年全球癌症报告显示，近年来我国胃癌新增病例和死亡人数均居世界首位，全球接近 50% 的新发胃癌病例来自中国。 然而，我国对于胃癌的诊断、治疗以及患者预后预测方面的规范还亟需完善。 对于病理医师而言，除了给患者提供规范化和信息详尽的病理报告之外，还需要对胃癌组织进行相关标志物的免疫组化检测，从而对胃癌患者的个体化治疗和预后预测提供依据。胃癌诊断和鉴别诊断相关免疫标志物普通型腺癌，如管状腺癌、乳头状腺癌、黏液腺癌、低黏附性癌或者上述组织学类型的混合性腺癌，常出现肠上皮 (表达 MUC2、CDX 鄄 2 和 CD10 等) 或小凹上皮 (表达 MUC1、MUC5AC 和 MUC6 等) 表型特征，它们的诊断通常无需借助免疫组化。 然而，一些特殊类型的胃癌，如低分化神经内分泌癌、肝样腺癌/ 产生 琢鄄 AFP 的腺癌、胃癌伴淋巴样间质 (多与 EBV 感染有关)、绒毛膜癌等，常需免疫组化标记协助确诊。低分化神经内分泌癌: 形态学特征与肺低分化神经内分泌癌相似，分为大细胞和小细胞两种类型，常出现多灶性或大量坏死，且核分裂象 & 20 个/ 10 HPF。 可选择 CKpan、Syn、CgA、CD56 等免疫组化指标鉴别。肝样腺癌/ 产生α-AFP 的腺癌: 大多数病例类似于肝细胞癌，可见胆汁或胞质内嗜酸性小球；局灶区域可见典型胃癌形态。 少数病例呈高分化乳头状、管状腺癌，细胞质透亮，易误诊为普通型胃癌，并且当胃和肝脏同时出现肿瘤时，鉴别诊断比较困难。 需应用免疫标志物如 Hep Par-1、AFP、CK19 和 CDX-2 等进行鉴别，上述 4 种标志物在胃肝样腺癌中常呈不同程度阳性表达，而肝细胞癌常不表达 CK19 和 CD-2。遗传性弥漫性胃癌 ( hereditary diffuse gastric cancer，HDGC): 对于能够满足国际胃癌联合会提出的临床诊断标准的 HDGC，需进行 E-cadherin 的免疫组化检测，甚至是 CDH1 基因突变检测，以便筛选或确诊。具有绒毛膜癌形态学特征的胃癌可标记 β-HCG 和 hPL 等进行确诊。
肉瘤样癌可应用相应分化标志物进行鉴别。某些重要病理学特征对胃癌的临床治疗和患者预后具有重要影响。 当怀疑标本断端和吻合圈有低黏附性癌细胞累及或淋巴结内微转移时，建议标记 CKpan 帮助确诊，但同时需注意排除浆膜面间皮细胞增生；若怀疑癌细胞位于脉管内时，可加做 CD31、D2-40 加以验证，需注意与人工假象 (由于取材等原因将癌组织挤压入脉管内) 鉴别；若怀疑癌组织犯神经时，可标记 NF 或 S 鄄 100 等加以验证。 胃转移性肿瘤少见，但确诊也必须结合临床病史和癌组织的免疫表型特征加以区分。胃癌治疗相关免疫标志物1. 胃癌分子靶向治疗相关免疫标志物 HER-2 2010 年，ToGA 临床试验结果显示，对于 HER-2 阳性胃癌患者而言与单纯化疗 (顺铂 + 5-FU 或卡培他滨) 相比，曲妥珠单抗联合化疗可显著改善患者总生存期 ( overall survival，OS) 和无病生存期 (disease-free survival， DFS) 及客观缓解率。 因此，HER-2 状态的精准检测对胃癌患者的个体化治疗是非常关键的，本共识推荐胃癌 HER-2 检测方法和评判标准要严格按照中国《胃癌 HER-2 检测指南》进行。2. 其它一些具有潜在临床应用价值的分子靶标 （1）血管内皮生长因子受体 2（vascular endothelial growth factor receptor2，VEGFR 2）主要作用是介导肿瘤血管形成信号通路。Ramucirumab（IMC-1121B）是一种全人源化的 IgG1 单克隆抗体药物，靶点是 VEGFR2 的胞外区，阻滞 VEGF 配体的相互作用，抑制受体激活。 最近，两项全球性、随机、双盲Ⅲ期临床试验结果发现，Ramucirumab 联合铂类和 (或) 氟尿嘧啶类药物 (REGARD 试验) 或 Ramucirumab 联合紫杉醇 (RAIN-BOW 试验) 与安慰剂联合相应化疗药物相比，能够提高初始化疗后病情恶化的晚期胃癌患者的 OS 和 DFS。因此对 VEGFR2 过表达的检测，很可能成为 Ramucirumab 靶向治疗胃癌的重要前提。（2）表皮生长因子受体 ( epidermal growth factor receptor，EGFR，又称 HER1) 人类表皮生长因子受体家族成员之一，相对分子质量为 1.7x104 跨膜酪氨酸激酶受体。 胃癌中 EGFR 基因突变罕见，而常表现为基因扩增或蛋白过表达。 最近，有研究发现 EGFR 免疫组化廾/ 卅的胃癌患者很可能富集从 EGFR 靶向单克隆抗体 (尼妥珠单抗) 中获益的胃癌患者。因此，对胃癌组织 EGFR 的免疫组化检测很可能具有潜在的临床应用价值。 EGFR 过表达胃癌患者的预后较差。MET 隶属于肝细胞生长因子受体家族，该基因扩增或蛋白过表达被证实为胃癌的驱动因素，多数研究认为 MET 蛋白过表达 (MET 廾/ 卅) 与胃癌患者较差预后有关。有报道显示，对化疗不敏感的胃癌患者出现 MET 蛋白过表达，给予 monovalent MET 抗体治疗后随访 2 年出现完全缓解。因此，对胃癌组织 MET 的免疫组化检测也具有潜在的临床应用价值。总之，目前有限的临床试验资料显示 VEGFR2、EGFR 和 MET 可能是胃癌潜在的分子靶标，但仍需大样本多中心临床试验加以证实。 因此，本共识建议各医疗机构可根据患者实际情况和本单位工作的实际情况酌情进行免疫组化检测。3. 胃癌化疗相关免疫标志物
Ki-67 是一种细胞核抗原，非 G0 和 G1 期细胞均可表达，常用于评价肿瘤细胞的增殖活性。 细胞毒性化疗药物只对进入细胞分裂周期 (G1、S、G2 和 M 期) 的肿瘤细胞有效，Ki-67 阳性率高意味着更多癌细胞进入细胞分裂周期且有可能对化疗药物治疗更有效。近年来，一些研究者通过对相关标志物的检测来预测胃癌患者对紫杉醇、氟尿嘧啶以及铂类等化疗药物敏感与否。研究发现 β-微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin Ⅲ) 表达水平很可能与紫杉醇疗效及患者预后呈负相关；胸苷磷酸化酶 ( thymidinephosphorylase， TP) 的高表达与 5-FU 和卡培他滨的疗效成正相关，TP 高表达且 β-tubulin Ⅲ低表达的胃癌患者对卡培他滨联合紫杉醇疗效明显提高，可达 80% 以上，OS 也明显延长。通过免疫组化检测核苷酸切除修复交叉互补基因 1(excision repair cross-complementation group 1， ERCC1) 能够有效评判胃癌患者对铂类化疗药物的敏感性；胃癌中胸苷酸合成酶 ( thymidylate synthase， TS) 高表达与以 5-FU 为主化疗敏感性下降有关。 目前，上述标志物的蛋白表达状态与胃癌患者预后以及相应化疗药物之间的关系还需要大样本研究进一步分析。总之，对于胃癌化疗药物相关免疫标志物，本共识推荐对胃癌组织进行常规 Ki 鄄 67 检测以评估癌细胞的增殖状态，并为术后化疗疗效提供参考。 对于与化疗药物疗效预测相关的免疫标志物，如β-tubulinⅢ、ERCC1、TS、TP、BRCA1 等，目前对其蛋白表达水平免疫组化检测的临床应用价值有限，故不推荐常规进行免疫组化检测。胃癌预后相关标志物近年来， 一些潜在的富集胃癌干细胞的标志物 如 CD133、CD44 和 Lgr5 等与胃癌的生物学行为和患者预后之间的关系越来越受到人们关注。 胃癌中 CD133 阳性表达模式分为腔缘阳性和细胞质阳性。 胃癌细胞如果出现细胞质 CD133 阳性，那么这些细胞就具有很高的恶性生物学行为，且与肿瘤进展、化疗耐药、复发以及较差预后均有关系。 因此，胃癌细胞的细胞质呈 CD133 阳性可能有助于患者预后预测。CDH1 基因是一种肿瘤抑制基因，其编码的 E-cadherin 跨膜糖蛋白与细胞之间黏附和上皮分化有关。 该基因突变与 HDGC 和散发性胃癌的发生和进展有关。
中国胃癌人群中 E-cadherin 异常表达比例约为 46% ，E-cadherin 失表达是胃癌患者的独立预后因素，原发癌阳性/ 转移癌阴性者比二位点均阳性者预后更差。 E-cadherin 阴性/ β-catenin 核阳性常与胃癌组织分化差、黏附性丢失、浸润能力强、肿瘤进展、预后差等相关。 因此，本共识推荐可酌情选择 CD133、E-cadherin 来预测胃癌患者预后。总结及展望综上所述，对于一些特殊组织学类型的胃癌，需要进行相关免疫标志物染色来加以确诊，如低分化神经内分泌癌需要标记 Syn、CgA、CD56 和 Ki-67 等；肝样腺癌/ 产生 α-AFP 的胃癌需标记 Hep Par-1、AFP、CK19 和 CDX-2 等；绒毛膜癌需要标记 β-HCG 等。 在胃癌治疗和预后方面，强烈推荐进行常规 HER-2 和 Ki-67 等胃癌相关标志物的免疫组化检测；对于具有潜在临床应用价值的分子靶向标志物如 MET、VEG-FR2 和 EGFR 等可根据各医疗机构胃癌患者的治疗现状酌情选择进行免疫组化检测。在胃癌化疗方面，β-tubulin Ⅲ、ERCC1、TP、TS 及 BRCA1 等标志物对于预测胃癌化疗敏感性方面的作用尚存在争议，故暂不推荐常规免疫组化检。E-cadherin 对于筛选 HDGC 以及预测散发性胃癌患者预后方面具有潜在临床应用价值，可酌情选择性进行检测；CD133 作为富集胃癌干细胞的标志物，能够反映胃癌的生物学性状和患者预后预测，也可酌情选择性进行免疫组化检测。文章摘自：《临床与实验病理学杂志》2014 年 9 期
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关于丁香园探讨免疫组化在低分化肿瘤鉴别诊断上的价值--《河北医药》1997年05期
探讨免疫组化在低分化肿瘤鉴别诊断上的价值
【摘要】：正 除了肉瘤各类型之间存在着鉴别困难外,有时肉瘤与低分化癌之间的区别也存在着困难。肉瘤细胞排列松散的特点,正与胞巢不明显的低分化癌难
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R730.4【正文快照】：
除了肉瘤各类型之间存在着鉴别困难外,有时肉瘤与低分化癌之间的区别也存在着困难。肉瘤细胞排列松散的特点,正与胞巢不明显的低分化癌难以区分,甚至做网状纤维染色也难以鉴别。因此本文除了做组织化学染色之外,还做了免疫组化染色,以探讨其在低分化肿瘤鉴别诊断上的价值。！
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擅长: 各种内科妇科常见疾病。
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&&&&&&病情分析：&&&&&&您好，免疫组化是一种染色方法，其基本原理是抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。免疫组化是对许多疑难肿瘤得到了明确诊断。因为在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。如果使用是免疫组化在其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%，所以在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可。简单的说免疫组化是来确诊肿瘤的恶性程度或者鉴别其他的肿瘤。&&&&&&指导意见：&&&&&&一般情况下，病理科如果在单纯的HE切片确诊不了的肿瘤，都是需要通过免疫组化来诊断的。祝您健康！
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