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【求助】hoechst33258和hoechst33342区别
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这个帖子发布于9年零54天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我的实验是自己合成了材料,然后装载模型药物阿霉素成为载药胶束.现在我想看载药胶束是否进入细胞核,所以打算用hoechst 33342染细胞核,同时加入载药胶束. 以为hoechst33342是蓝色的,阿霉素是红色的,所以能够区分开.现在的问题是:1. hoechst 33342染色后必须在20分钟内观察,否则会产生红色的激发光,影响观察,请问时间这么短吗?2.hoechst 33342和hoechst 33258有何区别?
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Hoechst 33342 比 33258更容易透过细胞膜，所以常用33342染死/活细胞，33258染死细胞。而有些种类的细胞由于可以更有效地将进入细胞的Hoechst染料主动转运到细胞外，所以染色会弱一点，这是一般也选择Hoechst 33342。
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Hoechst 33342染活细胞时，观察的时间没有那么严格，我们用倒置荧光显微镜观察时最长时间到2小时都没发现问题，但不知道用confocal会不会有什么不同用甲醛固定的细胞也试过，2小时没问题，但是不能长时间紫外激发，否则淬灭明显，转换观察视野时会发现刚才观察的地方蓝色比较黯淡
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我的细胞拍照时出现了比较明显的淬灭,请问跟曝光时间或是放置时间过长有关系么?
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hoechst 染死细胞的? 我已经订了怎么办呢?难道就不能染活细胞?
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hoechst 染死细胞的? 我已经订了怎么办呢?难道就不能染活细胞?
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关于丁香园BD FACSARIA III数据实例
H9细胞株的分化s
该试剂盒包含三种不同的荧光抗体，可以区分未分化((TRA-1-81和SSEA-3)和分化的(SSEA-1)多能干细胞。标志物的这种组合广泛应用于分析分选hESCs和iPS来源的分化和未分化的干细胞。
分选CD45RAA+和CD45RA-Tregs的设门策略
BD FACSAria II分别使用70-μm或100-μm喷嘴的设置（分别使用70psi或35psi压力设置，87或60kHz振荡频率）。CD45RA+Tregs和CD45RA-&Tregs使用纯度模式分选。
与488nm激光相比，561nm激光能更有效的激发mCherry和PE等荧光染料
在BD FACSAria II（488、405和633nm激光）和BD FACSAria III（488、405、633和561nm激光）上同样获取小鼠脾细胞的染色标本。弱荧光信号的细胞群只能用561nm激光才能检测到。
分选出的Treg细胞做FoxP3染色后所得的典型数据结果
根据FoxP3阳性状态来断定分选纯度，一部分细胞由抗人的FoxP3 BD Horizon(TM) V450抗体染色。图示为10个实验中获得的有代表性的典型数据结果。
CFP转染的HeLa细胞
445nm激光比405nm激光能更有效的激发CFP蛋白。在BD FACSAria III上，CFP转染的HeLa细胞用445nm和405nm的激光同时激发。445nm激发得到的区分度明显要高得多。
小鼠骨髓SP细胞
小鼠骨髓来源的细胞利用Hoechst 33342，c-Kit，Sca-1系列标志物标记，在装有375nm激光器的BD FACSAria III上采集数据。
SP群体（红色）全是c-Kit+Sca-1++.
使用的抗体是 c-Kit PE, Sca-1 PE-Cy(TM)7, Lineage FITC, CD34 APC, CD45 APC-Cy7, PI, Hoechst Blue, 和Hoechst Red.
肿瘤细胞株的SP细胞
人HT-29结肠癌细胞使用Hoechst 33342染色，装有375nm激光器的BD FACSAria III上采集数据（左侧散点图）。 作为对照样本，SP表达被抑制（右侧散点图）
比较不同平台检测CD4的结果
使用全血样本，单色的CD4 FITC，CD4 APC，CD4 Pacific Blue(TM)染色，在BD FACSAria II和BD FACSCanto II上系统完成检测的结果比较。BD FACSAria II设置为高速分选模式（70psi，90kHz）。两台机器都使用了BD流式细胞仪设置和追踪软件（CS&T）进行了仪器设置。
版权所有 Copyright(C)since2016 &南京乔贝琳生物科技有限公司激光器激发核酸燃料对染色体进行分析并分离。
各种类型稀有细胞的分离，纯化或富集培养
稀有的细胞群的分离纯化一直是传统研究手段无法解决的问题，现在可以通过流式细胞分选仪轻松的分选出感兴趣的稀有细胞群，在体外对这些细胞进行培养。比如SP细胞，流式细胞分选仪的375nm的激光器可以有效的激发Hoechst33342等核酸燃料，用以分离SP细胞。
单克隆细胞分选
流式细胞仪的ACDU 多孔板单克隆定位分选功能可以做到在细胞培养板的指定位置分选出1到数十万个细胞，使得传统繁琐的单克隆筛选变的异常的简单和有效。
高速流式细胞分选仪独特的成分分选功能，可以根据科研人员自行设定的不同比例分选出研究的一群细胞，可发现这些细胞在不同比例存在条件下的功能差异，细胞调控以及相互作用。 病原微生物学研究
通过流式细胞仪研究病原微生物的治病机理，治病分子以及感染过程中的免疫应答。 血液学研究
血液学研究领域会涉及到免疫功能相关的许多marker的改变、细胞活化、信号转导、细胞内功能分子的改变、细胞间相互作用等等。所涉及到的分子和检测物如网络般盘根错节，这就要求我们必须要进行多参数的分析才能较全面深入地探索其内在的规律和发现新的现象。流式细胞分选仪的多参数高速分选功能可以同时分析尽可能多的标记物，为找到不同Marker之间的关系和之间的机理提供了有效的方法，正因为如此配制多色荧光参数检测的流式细胞分选仪成为血液学分研究工作者的最有效的工具。
植物与水生生物的检测
如藻类、叶绿素(自发荧光检测)，反应细胞的活形状态。DNA染色与膜的选择性渗透性检测( PI+EB),反应细胞膜完整性和细胞生活能力膜脂活性检测（FDA探针），反应生物细胞的代谢活性膜电位检测,反应细胞繁殖生长的状态DNA含量测定，界定种群细胞细胞周期分配、生物的分裂率等。
先进流式细胞仪的发展趋势
自从1973年， BD公司推出世界上第一台流式细胞仪以来，流式分析和分选技术不断地发展。目前，流式细胞技术它不仅可以测量细胞大小、内部颗粒的性状，还可以检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞因子、细胞内DNA、RNA含量等；它可对群体细胞在单细胞水平进行分析， 在短时间内检测分析大量细胞，并收集、储存和处理数据，从同一个细胞进行多参数定量分析；并且能够分类收集(分选)出某一亚群细胞或单细胞。目前，该技术已经广泛应用于基础研究与临床检测，在免疫学、细胞生物学、遗传学、血液学、肿瘤学、药物学、植物学、水生物学、分子生物学等学科广泛应用。是现代生物医学研究的一个全新的视角和强有力的手段。
当前最先进的流式细胞分选技术的发展主要体现在以下几个方面：
1、多激光多色分析技术
从最早的单激光流式，到近期的双激光和三激光，到当代最先进的六激光技术；从最早的单色和双色分析，到近期的六色到十色分析，到当代最先进的十八色分析。多激光多色分析技术的发展是先进流式分选技术发展的一个重要标志。
多色分析技术能够在一次实验中大大提高信息量，各个不同的检测指标之间的相互关系也越清晰。同时也可以做到节约标本，节省试剂，降低工作量。2004年，Nature杂志上就发表了讨论12色以上流式技术的应用的文章。
多激光技术不仅可以在多色分析技术的应用中为不同的荧光素提供特殊的激发波长，减少荧光信号间的相互干扰，同时，特殊波长的激光器也支持不同的特殊应用。比如，561nm激光检测RFP，375nm激光检测SP细胞，445nm激光检测CFP等。目前国际最先进的流式分选仪器能够同时安装6根不同波长的固体激光器，充分满足各种不同检测的需求。
2、高灵敏度检测技术
仪器灵敏度的提高意味着检测能力的提高，能够检测到以前无法检测到的信号，这非常有利于发现一些低表达的细胞群体。这些低表达的细胞群体以往由于检测技术灵敏度的限制，无法被发现，而他们往往又是研究人员专注的重点。因此，提高灵敏度是先进流式技术发展的又一重要标志。当代最先进的流式的检测灵敏度在FITC上可以小于100MESF，在PE上可以小于30MESF。
3、自动化控制技术
流式细胞技术作为一种高精尖的技术，以往只能被少数非常有实验经验的技术人员所熟练掌握。但当前，流式细胞技术已经越来越广泛地被各种实验所应用。因此，发展出一套能够让实验人员能够方便、快速和准确使用的实验设备是流式发展的趋势。目前，最先进的代表技术包括能够让实验人员从繁琐耗时的仪器光路调节中解脱出来的固定光路技术和能够自动确定液滴延迟时间的Accudrop技术。这两个技术的使用，让流式分选技术真正的成为了一个能让实验室技术人员能够快速掌握和准确使用的技术。
第四部分 Aria III的主要特点
Aria III是全球领先的流式细胞仪供应商美国BD公司在2010年推出的最新型号的高速流式细胞分选仪。Aria系列流式细胞分选仪，在全球高端流式市场上占有80%以上的市场份额，是性能最尖端，实验结果最可靠和自动化程度最高的流式细胞分选仪系列。
2010年， BD推出的Aria III高速流式细胞分选仪具有以下杰出优势，以服务于广大科研人员从事最顶尖的实验研究。与其他老一代的流式分选仪比较， Aria III具有以下无可替代的优势：
1、 能够同时安装多达6根固体激光器，同时使用4根不同波长的激光器。
Aria III标准配置能够同时安装488nm，633nm，561nm，375nm，405nm和445nm六根不同波长的激光器并同时使用其中的4根，以满足不同科研领域的应用需求，符合现代流式细胞仪技术多激光多色的发展方向。每个激光器都有其特殊的应用，在现代的高级应用中，多色的流式细胞仪实验往往需要4根以上的激光器同时使用。Aria III仪器升级方便，能够随时方便地添加激光，能够满足现在和将来的发展需求。
而Beckman公司90年代推出的MOFLO XDP同时只能使用三根激光器，标准配置也无法安装561nm，375nm，445nm激光器，显然已经无法满足现代技术的发展，仪器应用领域窄小，无法满足现在和将来的需求。
X-6激光器底盘系统
不同激光器，对应不同的应用范围：
1）488nm激光：用于细胞表面或胞内蛋白/抗原检测分析，细胞增殖、活性、凋亡及周期和倍性分析，
荧光蛋白检测，基因和信号分子检测，细胞器的分析，可溶性蛋白检测等等。是流式细胞仪最常用的激光器之一。可激发的荧光素包括：FITC, PE, PerCP, Alexa Fluor? 488,GFP等。
2）633nm激光：用于细胞表面或胞内蛋白/抗原检测分析，基因和信号分子检测等等。是流式细胞仪
最常用的激光器之一。可激发的荧光素包括：APC， Alexa Fluor? 647，BD APC-H7，APC-Cy7等。
3）561nm激光：用于细胞表面或胞内蛋白/抗原检测分析，可激发的荧光素包括：PE，PE-Texas Red?，
PE-Cy5，PE-Cy7，RFP，mCherry等。其中利用561nm激光器激发PE，可以大大减小PE和FITC的光谱重叠，极大提高检测灵敏度和分辨率，从而发现一些以前不能被发现的低表达的细胞群体和特殊表面标志物；同时，561nm激光器可以鉴定RFP转染效果以及追踪转染的细胞，并分选出感兴趣的细胞群；而基于mCherry的双分子荧光互补系统研究(BiFC)，更能够检测细胞内蛋白质之间的相互作用，具有简单,快速,直观,灵敏及定位等特点。
4）375nm激光：结合BD公司的最新NGX石英流动检测池，可改变以前只能采用大功率355nm激
光检测SP细胞的现状。在干细胞和细胞治疗研究中，能够高灵敏和高特异性分析和分选SP侧群细胞。同时，375nm激光可以用于细胞周期检测，尤其适合活细胞的细胞周期倍性分析；钙离子的检测（一种荧光染料实现结合钙和游离钙的同时检测）也可以通过375nm激光检测Indo完成。 5）405nm激光：紫色荧光石最新发展出来的一类新型荧光，主要包括Qdot系列，BD Horizon V500，
AmCyan，BD Horizon V450，Pacific Blue?荧光素。在流式细胞技术多激光多色的发展方向中，紫色激光是流式技术由6色以下发展到8色和10色的关键激光，其激发的紫色荧光素能够很好的与红色和蓝色共同使用，荧光信号强，荧光干扰少。而Qdot是一种生物学领域和纳米学领域相结合的产物，对于细胞成像来说具有吸收性高、量子产量高等优点，其具有超强的荧光稳定性，光谱范围广，可应用于肿瘤靶标细胞的标记与示踪。
6）445nm激光：能够高灵敏和高分辨率地检测CFP荧光蛋白，进行转染效果评估和追踪转染细胞，
也是进行细胞内蛋白质之间的相互作用研究的重要手段。同时，445nm激光配合375nm激光，也是染色体检测和分选的主要手段。
2、Aria III能够同时检测18色荧光
流式细胞仪多激光多色的发展能够大大的加快科研的进展，能够同时检测越多的荧光信号，就能够大大地节约实验时间、减少试剂消耗，并且，各个不同的检测指标之间的相互关系也越清晰。因此，在现代的流式实验中，科学家都最求更多的荧光信号能够被同时检测，同时检测10色以上的检测能力，是当前先进流式检测技术的标志。Aria III能够同时检测18个报告荧光信号，加上FSC和SSC，共20个信号。为研究人员一次提供巨大的信息量，加速科研的进展速度。利用405nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的流式细胞技术--《现代生物医学进展》2015年33期
利用405nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的流式细胞技术
【摘要】：目的:探讨流式细胞仪上405 nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA的效果及影响检测结果的因素。方法:SW480和A549两种细胞经Hoechst33342染色后,流式细胞仪405 nm激光激发检测DNA含量,利用软件计算出处于G0/G1期、S期和G2/M期细胞的百分比,以PI染色法结果作为对照。结果:SW480和A549细胞经Hoechst33342染色后各期的细胞百分比与PI染色法基本一致,无明显差异(P0.05)。结论:405 nm激光激发Hoechst33342染色细胞DNA结果可靠,可作为紫外检测的替代方法。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R446.1【正文快照】：
Chinese Library Classification(CLC):R-331 Document code:BArticle ID:15)33-6406-04前言细胞DNA含量检测即细胞的周期检测,在研究细胞增殖分裂过程中具有重要的意义[1,2]。单细胞悬液经通透处理后,加入能够与DNA结合的荧光染料,此时被染荧光物质的量与DNA含量
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【参考文献】
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【共引文献】
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【二级参考文献】
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