我做PCR扩增后溶液大部分蒸发了,按理说体积小于30uL不能送去测序,PCR失败,我能不能往里面加ddH2O?水蒸发后里面还有目的基因吗?我能不能加原来加的水呢?为什么?
加水,然后电泳检测下看看有没有目的条带,有目的条带的话问题不大,没有目的条带就重新P吧,反正做次PCR费不了多大的事.
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没有水了怎么扩增啊
扫描下载二维码如何稀释新引物啊刚开始做实验,准备做pcr,引物来了后,管壁上写着1OD=33ug,请问如何稀释到10uM/L,急用,
用TE（或ddH2O）稀释,按引物合成报告单上写的先稀释到100uM（一般有To dissolved into 100uM,add XX ul water...,不过注意一下是1OD的还是一管的,一般指1OD加这么多）,作为贮存液.然后再取出一部分,稀释10倍到10uM,使用
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你在哪个公司合成的引物？引物合成报告单上会写的很明白，加多少水稀释到100μM或10μM。仔细看看。
33ug在多少体积里面？算出母液浓度以后再稀释。
管壁上一般还有mol数，你去根据这换算吧。
扫描下载二维码& 请问做pcr的模板DNA用什么稀释要好些，TE 还是ddH2O?
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请问做pcr的模板DNA用什么稀释要好些，TE 还是ddH2O?
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请问做pcr的模板DNA用什么稀释要好些，TE 还是ddH2O?
请问做pcr的模板DNA用什么稀释要好些，TE 还是ddH2O? [转自 丁香园论坛]
还有，原理是什么？
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这个。。。我实验室里的模版DNA有人用TE稀释，也有人用双蒸水稀释，没有见到谁的PCR产物有明显的差别。只不过TE难得配，所以大多数人都用双蒸水；但是近期由于冻存的双蒸水用完了，所以大家开始用TE。。。还有人用试剂盒里提供的DNA溶解缓冲液，似乎都没什么影响。
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一般来说还是ddH2O比较好，TE buffer 中含有EDTA，会螯合PCR体系里边的镁离子，对PCR有影响！！！
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谢谢回复！
但是配TE的时候一般用的都是EDTA.Na2，应该对镁离子影响不大吧？
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强烈建议用TE去溶解稀释DNA模板！！！ddH2O去溶的话不利于DNA的保存，反复冻溶和保存时间稍微长一些的话，DNA就会降解的很厉害，尤其在DNA浓度不是很高的情况下。而TE溶液中保存的话，则可以大大的缓解这种情况。至于，EDTA螯合PCR体系里边的镁离子的问题，完全可以忽略，或者稍微提高镁离子的使用终浓度来解决。我做的100ul体系里面加入10ul的模板，也没有看到对PCR产物的产量有什么影响。一家之言，仅供参考。
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而且我听说用TE溶解的话ph值更稳定，更有利于pcr扩增。
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如果短期，还是DD水方便，但是要长期保存TE更好！它的PH值更利于DNA不降解
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楼主，你好
TE buffer 是Tris碱和EDTA配成的缓冲夜，实验室融解DNA用的一般为PH8.0的，关于你的问题我的看法如下：
1：你提出的DNA如果是PCR用，TE或ddH2O融解，对PCR基本上没有影响
2：如果你提出的DNA是用来酶切的，尽量用ddH2O,因为EDTA对有些酶有抑制作用
3，如果提出的DNA需要长期保存，一定用TE来融解，可避免反复冻融，延长DNA的使
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楼上的分析的很好！
虽然只是个小问题，很容易忽视，反正我是拿不太准。
我是新手，多谢指教！
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用5mM的Tris行么？真的没认用过请问哪位大侠能帮我看看我跑PCR的条带是什么原因成这样啊?其中所有的试剂都是新的，此外做之前的试剂准备什么啊？3.2.2.4.3&PCR扩增反应反应体系：ddH2O&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&14.7μL缓冲液（含Mg2+，10x&Taq&酶自带）&&&&2μL&&&&dNTPs(10mM/L)&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&0.4μL&&&&F(50ng/μL)&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&0.8μL&&&&R(50ng/μL)&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&0.8μL&&&&Taq聚合酶（5u/μL）&&&&&&&&&&&&&&&&&&0.2μL&&&&DNA模板&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&1μL&&&&Total&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&20μL反应条件：&&&&94℃预变性2min，94℃变性30sec，50℃退火35sec，72℃延伸120sec，32&cycles，72℃延伸10min，4℃条件下保存。
忻格格吉祥La
从程序看，你的目的是扩增2000bp左右的片段，从电泳结果目的带没有扩增出来，你的那些带都是非特异扩增。建议 1、做一下退火温度的梯度；2、增加模板浓度；3、更换扩增用的酶，使用更高级的酶，能够扩增复杂模板。
没扩出来，看到的smear应该是引物二聚体
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扫描下载二维码PCR的primer配置的时候用水还是TE稀释 - PCR实验 - 生物秀
标题: PCR的primer配置的时候用水还是TE稀释
摘要: [PCR的primer配置的时候用水还是TE稀释] 买的是现成的primer，要配置stock solution是用TE配置还是用DDW配置？谢谢 关键词:[]……
买的是现成的primer，要配置stock solution是用TE配置还是用DDW配置？谢谢
回复就用做PCR的水配置储存液吧 工作液也用水配注意不要污染回复来自申能博采的网站，供参考！1.如何溶解引物？答：干燥后的引物质地非常疏松，开盖前最好离心一下，或管垂直向上在桌面上敲敲，将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或10mM Tris pH7.5缓冲液，室温放置几分钟，振荡助溶，离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水，因为有些蒸馏水的pH值比较低（pH4-5）,引物在这种条件下不稳定。 2.如何保存引物？答：引物合成后，经过一系列处理和纯化步骤，旋转干燥而成片状物质。引物在溶解前，室温状态下可以长期保存。溶解后的引物-20度可以长期保存。如果对实验的重复性要求较高，合成的OD数较大，建议分装，避免反复冻融。修饰荧光引物需要避光保存。我们实验室一直用的是公共实验室摩尔提供的一级水（三蒸水，PH=8.2)配置引物，因为引物量每天用的挺多，所以不管引物还是模板均没有用TE配，TE里面的可能对PCR反应中的TAQ酶有抑制作用。回复楼上的站友是不是直接从网上copy过来的? 建议copy的时候也要注明 "转自XXX"
最好能写进去自己的体会和建议啊回复谢谢楼上的，我今天就是用水配置的，尽管出结果了，但是担心以后会不会有影响。回复早点用完
保存时间长了可能会有影响
但我配置的储存液用一个月没什么问题回复早点用完
保存时间长了可能会有影响
但我配置的储存液用一个月没什么问题回复我的引物的储存液在－20度放了四个月再拿出来用也没什么问题就是用灭菌双蒸水配的回复灭菌双蒸水配!!!你又不是一次配好多!!!先配贮存液慢慢再配!!回复今天看见师姐加了三蒸水溶解引物，之后－20度冻起来。可是我还看见一种方法：加很多东西，又要离心30秒的，振荡静置。。。是干什么用，是配储存液？谁能告诉我一下～～～～回复灭菌双蒸水配就可以了没有那么麻烦的.TE比较适合储存.相关的操作没有那么严格的.这与RNA相关的操作完全要求不一样.回复我们都是用灭菌去离子水溶，没有什么问题。很早以前有位同事是用1/10浓度的TE溶解。
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