loading buffer_百度百科
loading buffer
loading buffer 的中文名字叫上样,6*的缓冲液中可以显示两条带，前面的紫兰色的条带是，在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中，溴酚兰的迁移率分别与1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同；后面的兰色条带是二甲苯青，它在1%和1.4%琼脂糖中电泳时，其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似。而对于PAGE胶他们的迁移速率也分别不同。
loading buffer主要用途
loading buffer的功能主要有两个。第一，里边的指示剂和二甲苯氰FF起到指示的作用，显示电泳的进程，以便我们适时终止电泳；第二，里边的成分甘油可以加大样品密度，使样品密度大于TAE，从而沉降到点样孔中，防止样品飘出点样孔。另外，有的Buffer是加有SDS的，一般都会写明。SDS主要是促使变性，因为没有除尽的聚合酶会结合在DNA双链上影响它的。细胞裂解后的裂解液，加loading 100℃加热，也是为了中止酶促反应，防止提取的。
loading buffer制备方法
6×loading buffer 一般配置：
6×Loading buffer:
36%(v/v) Glycerol
0.05%(w/v) Xylene Cyanol FF
0.05%(w/v) Bromophenol Blue
主要用于DNA电泳
10×Loading buffer:
50%(v/v) Glycerol
0.25%(w/v) Xylene Cyanol FF
0.25%(w/v) Bromophenol Blue
主要用于RNA电泳
10 X loading buffer中仅有色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)一种染料（浓度0.05%）；
6 X loading buffer中含色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)、二甲苯腈蓝FF（Xylene Cyanol FF)两种染料（浓度都是0.05%）
在琼脂糖凝胶（0.5% ~ 1.4%）中溴酚蓝（Bromophenol Blue）约与300 bp的双链线状DNA的迁移速度相同，二甲苯腈蓝FF则与4 kbp的双链线状DNA的迁移速度相等。
6Xloading buffer是用来上样的；10Xloading buffer是stop buffer，是停止酶促反应的，如果一定要用10Xloading buffer的上样当然也可以，唯一要注意的是：10Xloading buffer中多了一样SDS，它会使酶类如taq酶变性，以PCR产物为例，在电泳泳道上会产生一片弥散，如果电泳跑的距离短，和多出来一条带没有什么区别（大概1000bp左右）。
5×SDS-PAGE Loading Buffer配制方法
组份浓度：
250mM （pH6.8）
10%（W/V） SDS
0.5%（W/V） BPB
50%（V/V） 甘油
配制量： 5mL
配制方法：
1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。
1M Tris-HCl 　1.25mL
SDS　 0.5g
BPB　 25mg
甘油 　2.5mL
2.加入去离子水溶解后定容至5mL。
3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。
4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。
5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右
企业信用信息请问你的PCR问题后来怎么解决的PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时，所有样都不出现条带，而是弥散状的，从头拖到尾，而maker却是好的，说明不是电泳的问题，我把所有的酶，buffer,Mg+都换了一遍了还是找不到原因，结果照旧。
PCR最重要的因素肯定是引物,其次是模板,再其次才是其他乱七八糟得东西,在确保你这两个东西都是正确的,实验前验证过后,你可以其他的东西,酶不好就直接用mix得了,虽然贵一点,但是效果也比较好,我就经常用mix.
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有可能是扩增问题。在确保试剂操作没有问题的前提下改变条件扩增条件.还有一个可能就是样品降解.
1.做退火温度的梯度实验检查退火温度是否合适。2.适当加长延伸时间，延伸时间太短可能导致不能完全合成片段。上述都没有问题那就很可能是引物的问题了，重新设计引物试试。祝你成功！
扫描下载二维码电泳时加入loadingbuffer的问题(电泳,跑电泳,原理) - PCR实验 - 生物秀
标题: 电泳时加入loadingbuffer的问题(电泳,跑电泳,原理)
摘要: [电泳时加入loadingbuffer的问题(电泳,跑电泳,原理)] 我做的定量PCR。然后拿定量产物跑电泳，10ul的产物+10ul的loadingbuffer。然后就没跑出来！！！个人觉得是loadingbuffer加入的量太多了。请教大侠，loadingbuffer加入过量造成的后果及原理。。。。。谢谢！！！！！ 关键词:[电泳 跑电泳 原理]……
我做的。然后拿定量产物跑电泳，10ul的产物+10ul的loadingbuffer。然后就没跑出来！！！个人觉得是loadingbuffer加入的量太多了。请教大侠，loadingbuffer加入过量造成的后果及原理。。。。。谢谢！！！！！
回复loading buffer对电泳没多大影响，最大的可能就是你没有扩出来目的片段回复loading buffer对电泳没多大影响，最大的可能就是你没有扩出来目的片段貌似不对吧，目的片段我是肯定得到了，个人觉得buffer加太多覆盖了目的片段，以至于看不到。但是不太确定回复Loadingbuffer的成分是：EDTA,溴酚蓝，二甲苯青，甘油，在电泳上样并没有严格限制（当然你可以按照标准来加），你觉得这些成分会覆盖DNA?我看要不就是没有目的条带，要不就是你的糖胶没加EB.回复Loadingbuffer的成分是：EDTA,溴酚蓝，二甲苯青，甘油，在电泳上样并没有严格限制（当然你可以按照标准来加），你觉得这些成分会覆盖DNA?我看要不就是没有目的条带，要不就是你的糖胶没加EB.我今天又重新做了，loadingbuffer加的少了，结果就出来了。回复貌似不对吧，目的片段我是肯定得到了，个人觉得buffer加太多覆盖了目的片段，以至于看不到。但是不太 ...你的目的片段多大啊，，这种可能性实在不大，marker能看到么?回复分开放两个泳道跑不行吗？回复我今天又重新做了，loadingbuffer加的少了，结果就出来了。无法理解。。Buffer加多了怎么会跑不出来呢。。回复请问您重新做的是哪一步啊？只是跑电泳那步吗？
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【求助】SDS-PAGE条带上半部分清楚,下半部分弥散,为什么?
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我跑的SDS-PAGE,考染出来上半部分的蛋白条带还可以,但下半部分的条带就有些弥散,不知为什么?是我的蛋白降解了,还是分离胶聚合得不均匀呢?
另外,我的浓缩胶一直聚合得不好,在电泳时看到溴酚兰呈粗粗的一条带而不是一根细细的线,这样对电泳结果有怎样的影响呢?查看完整版本请点击这里：
abc816 ( 17:32:52)
我跑的就是9*10的小胶,觉得浓缩胶偏短.但是我需要的蛋白条带之一就是25KD的,这个区间的条带已经比较弥散了,不知后面做转膜和抗体杂交会不会影响?
bring ( 17:33:12)
应该没有什么影响！我做western blot时的蛋白之一是26KD，效果还行！
xyw5 ( 17:33:35)
不知道你是恒压还是恒流,如果恒压,是因为跑到最后电压太大,速度太快,而且散热太多造成的.如果恒流,是跑到最后,电压太小,造成速度太慢,条带弥散而成.所以你你应该调一下你的电泳条件.另外,试下在冰浴中跑,这样散热好些.其实SDS-PAGE最好的分离处在距顶部三分之二处,因为无论怎样,最后总会弥散,只是程度不同而已.你应该先计算一下胶浓度和你的蛋白分子量的关系,尽量把目的蛋白跑在最佳位置.
mimili_901 ( 17:34:56)
最近一直在跑电泳,也来说两句
以前跑的是SDS-PAGE，loading-buffer里含有2-ME和PMSF，发现跑带会出现溴酚蓝线不能形成很好的一条线的情况，最近跑NATIVE-PAGE，提取液和loading-buffer里只有蔗糖（甘油）+溴酚蓝+Trir-HCl，这样跑出来的溴酚蓝线就很平很窄了（即使上样量比较大），而且在浓缩较里就很快形成一条细线了。
另外，我做的浓缩胶是3.33%的，也能成型的，关于你说的聚合的不好可以考虑下AP的问题，或者详细说说你的情况
2541 ( 17:35:34)
我们用的是恒流，小板每板开始在浓缩胶15mA，进入分离胶用20mA,也出现了高分子量带形较好，而低分子量区弥散，望指教！
abc816 ( 17:40:53)
谢谢大家！我用的是恒压，浓缩胶80V，分离胶100V。的确跑到最后电泳槽比较热。下次我试试在冰浴中跑。另外，有没有人发现在胶聚合后拆封胶条时不太好操作，我经常会弄得两快玻板移位，产生气泡。不知大家有何高见？
guagua ( 17:41:17)
胶板移位的原因多数是没有压紧，拆下来的时候动作要慢。我的胶跟你的差不多，胶的上半部分有模糊的带而下半部分没有带，只有甬道，我跑蛋白胶已经差不多有半年了，还是没跑出来，快急死我了。
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【求助】电泳时Loading Buffeer为什么弥散？
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本人做western，浓缩胶5%，分离胶10%，目的蛋白45KD，上样量10微升，跑电泳时为何Loading buffer都弥散了呢（见下图）？另外，转膜后，胶上还可见Marker残留（见下图），未完全转到PVDF膜上，转膜条件100v 70min，以前按照这个条件做，marker都能完全转到膜上，这次为什么是这样呢？请大侠们指点迷津。
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43retre 某个试剂配错了 我分离胶配方如下：去离子水：4ml30%丙烯酰胺：3.3 ml1.5M 分离胶缓冲液 2.5ml10%SDS 0.1ml10%APS 0.1mlTEMED 10微升战友，看看有什么问题？谢谢
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baby3480 看看你的样品里的盐是不是很高，比如铵盐 癌和癌旁组织，盐不高啊，那会是什么原因导致的啊？
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分离胶缓冲液重新配 请问大侠，分离胶缓冲液为何需重新配呢？
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